2. Выбор длины волны светового потока

Выбирается длина волны, обеспечивающая максимум поглощения раствором падающего светового потока, что обеспечивает наибольшую чувствительность и точность определения. Для этого измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при разных длинах волн (разных светофильтрах) и строят график зависимости D = f(λ).

Для выбора длины волны можно пользоваться таблицей:

Наблюдаемые цвета и соответствующие им поглощённые участки спектра

Окраска раствора – наблюдаемый (дополнительный к поглощённому) цвет	Цвет поглощённой части спектра	Интервал длин волн поглощаемой части спектра, нм ( максимум поглощения)
жёлтый	синий	400-450
красный	Сине-зелёный	450-500
пурпурный	зелёный	500-560
фиолетовый	Жёлто-зелёный	560-575
синий	жёлтый	575-590
Зелёно-синий	оранжевый	590-625

2. Оптимальный диапазон измерения оптической плотности

Закон Бугера–Ламберта–Бера нарушается при очень малых (D < 0,1) и больших концентрациях веществ (D > 1,5), что приводит к изгибанию графика.

Минимальная относительная погрешность метода отвечает оптической плотности исследуемых окрашенных растворов в интервале значений 0,4 < D < 1,2; точность фотометрических определений составляет 3-5%.

2. Толщина поглощающего слоя

Для фотометрии обычно используют кюветы с толщиной поглощающего слоя 1 − 5 см. Увеличение толщины кюветы приводит к возрастанию потерь на рассеяние светового потока. Кюветы, применяемые в фотометрии, изготавливаются из кварца или специальных сортов стекла.

2. Отклонения от основного закона светопоглощения

− Закон Бугера–Ламберта–Бера точно справедлив для монохроматического света. Поэтому одной из основных причин отклонения от линейной зависимости оптической плотности от является недостаточная монохроматичность светового потока, что не исключается и при работе на спектрофотометре.

− Причиной отклонения оптической плотности от основного закона светопоглощения может быть рассеяние светового потока, вызванное снижением прозрачности растворов, появлением в них мути, механических взвесей и т.п.

− Светопоглощение раствора зависит от многих факторов: концентрации анализируемого вещества, гидролиза, сольватации, образования промежуточных продуктов, рН среды, влияющей на устойчивость и полноту образования окрашенных комплексов.

Таким образом, колориметрические и спектрофотометрические определения следует проводить в строго определенных интервалах значений  концентраций раствора и рН среды. Нужный интервал  среды в ряде случаев создается применением буферных растворов.

Основные преимущества фотометрических определений − высокая чувствительность (10^-5-10^-6 М), быстрота и легкость определений.