4. Исследование живых клеток микроорганизмов методами раздавленной и висячей капли

В обоих случаях окрашивание объекта проводят «прижизненными» красителями – витальная окраска. Прижизненными красителями могут служить метиленовый синий, нейтральный красный в концентрациях от 0,001 до 0,0001%.

Оба метода применяют для выявления подвижности клеток микроорганизмов, наблюдения за размножением, образованием и прорастанием спор, установления реакции микроорганизмов на химические соединения и физические факторы воздействия, изучения размеров клеток, характера их расположения, определения запасных веществ в клетке.

Препараты микроскопируют, слегка затемняя поле зрения; конденсор немного опускают, поступление света регулируют вогнутым зеркалом. Вначале пользуются малым увеличением – объектив 8х, после того как обнаруживают край капли, устанавливают объектив 40х или иммерсионный (90х). Более четкие результаты можно получить при микроскопии в темном поле или в фазовом контрасте.

При использовании метода раздавленной капли на чистое предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. В нее вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы под ним не образовывались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному и удаляют избыток воды фильтровальной бумагой, поднося ее к краям покровного стекла. При просмотре приготовленного препарата под микроскопом с иммерсионным объективом на покровное стекло наносят каплю кедрового масла.

Метод удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также просмотра крупных объектов – микроскопических грибов, дрожжей. Его применяют также при изучении запасных веществ клетки.

Для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов применяют метод висячей капли.

Для него требуется специальное предметное стекло с лункой посередине. На стерильное покровное стекло наносят иглой негустую суспензию микроорганизмов, выращенных в жидкой питательной среде или подготовленных для данной цели. При выращивании на плотной среде микроорганизмы предварительно разводят в физиологическом растворе (0,5% NaCl). Покровное стекло переворачивают и помещают на стерильное предметное стекло с лункой так, чтобы капля свободно свисала в лунку. Для герметичности края лунки смазывают вазелином.

Размеры бактериальных клеток варьируют в широких пределах. Диаметр кокков и палочек составляет 0,3–1,5 мкм, а длина палочковидных бактерий может достигать 10 мкм. Максимальную длину клеток имеют спирохеты – до 500 мкм, но они остаются невидимыми в связи с ничтожно малым диаметром их клеток.

Типы расположения жгутиков и механизмы движения бактерий

Формы и расположение спор у бацилл и клостридий

1– бациллярное центральное,

2 – бациллярное терминальное, 3 и 5 – плектридиальное,

4 – клостридиальное,

6 – латеральное