- •2. Изучить методы исследований, применяемые в микробиологической практике
- •3. Изучить устройство микроскопов и правила работы с ними
- •1)Микроскопия в темном поле
- •2) Метод фазово-контрастной микроскопии
- •4) Электронная микроскопия
- •4. Изучить морфологию шаровидных бактерий по рисункам, муляжам, зарисовать
- •4. Исследование живых клеток микроорганизмов методами раздавленной и висячей капли
1)Микроскопия в темном поле
В основе метода лежит эффект Тиндаля – рассеивающийся пучок света при наблюдении сбоку имеет вид голубоватого конуса на темном фоне. При освещении объекта косыми лучами света эти лучи, не попадая в объектив, остаются невидимыми для глаза, поэтому поле зрения выглядит темным, но оптически неоднородные клетки, находящиеся в поле зрения и попадающие в сферу прохождения лучей, отклоняют их в такой степени, что лучи попадают в объектив. Поскольку лучи света идут именно от объектов, исследователь видит их в темном поле интенсивно светящимися.
2) Метод фазово-контрастной микроскопии
Разработан для наблюдения за прозрачными объектами. Он основан на преобразовании фазовых изменений, претерпеваемых световой волной при прохождении через объект, в видимые амплитудные с помощью определенного оптического устройства:
фазово-контрастное устройство состоит из фазовых объективов (на оправе имеется буква «Ф»), конденсоров с набором кольцевых диафрагм и вспомогательного микроскопа (оптического устройства, помещаемого в тубус вместо окуляра при установке фазового контраста
3)Люминесцентная, или флуоресцентная, микроскопия
Ряд биологических объектов способен при освещении коротковолновыми лучами (сине-фиолетовыми, ультрафиолетовыми) поглощать их и испускать лучи с более длинной волной. При этом клетки будут светиться желто-зеленым или оранжевым светом. Это собственная, или первичная, люминесценция.
Нелюминесцирующие объекты можно обработать специальными флуоресцирующими красителями – флуорохромами (акридином желтым, акридином оранжевым, аурамином, примулином, тиофлавином, конго красным, калькофлером белым) и также наблюдать люминесценцию. Это будет наведенная, или вторичная, люминесценция.
Препараты, окрашенные флуорохромами, изучают в средах, не люминесцирующих под действием коротковолновых лучей: в воде, глицерине, вазелиновом масле или физиологическом растворе.
4) Электронная микроскопия
В отличие от светового микроскопа освещение объекта происходит не лучами света, а потоком электронов. Трансмиссионный электронный микроскоп состоит из электронной пушки, электромагнитных катушек, которые выполняют роль конденсорной, проекционной и объективной линз, предметного столика, экрана, окуляра и вакуумного насоса. Исследуются целые клетки и срезы клеток. Сканирующий электронный микроскоп дает трехмерное изображение объекта. Разрешающая способность электронных микроскопов достигает 0,2–0,4 нм, увеличение – 100 000 раз.
Электронный микроскоп
Клетки бактерий в сканирующем электронном микроскопе ( x 11000).
4. Изучить морфологию шаровидных бактерий по рисункам, муляжам, зарисовать
Рис. 3. - Микроскопическая картина (препарат шаровидных бактерий, простая окраска, иммерсия, объектив 90х15)
1 – Микрококки (Micrococcus),
2 – диплококки (Streptococcus), 3 – стрептококки (Streptococcus),
4. – стафилококки (Staphylococcus),
5 – сарцина (Sarcina),
6 – бактерии, 7 – спириллы,
8 – вибрионы
