Содержание общего белка в сыворотке крови прудовых рыб, %*

Возраст, Масса, г	Условия, особенности	Белок, %
1	2	3
Карп
0+	Нормальное состояние, лето	3,0
	Плохие условия, лето	2,5
	Нормальное состояние, осень	3,0-4,5
	В конце зимовки	1,5-1,7
1+	Плохие условия, весна	2,5
	Хорошие условия, весна	2,8
	Хорошие условия, лето	3,5
	Плохие условия, бетонные садки, лето	2,8
250	Голод (бетонные садки): октябрь-май	3,1
	Октябрь-июнь	2,1
	Октябрь-август	1,4
	Больной краснухой, июль	0,6
3000	До нереста	5,7
	После нереста	4,1
Пестрый толстолобик
1+	Нормальное состояние, лето	3,60,1
4+	После введения гормона	1,7-3,0
	Производитель с плохой икрой	0,7-1,0
Белый толстолобик
1+	Нормальное состояние, лето	4,60,2
	45 дней корм сине-зеленые водоросли	1,90,2
Форель радужная
10-15	Нормальное состояние, зима	2,6
80-150	Нормальное состояние, зима	3,8
25-30	Нормальное состояние, июль	5,4
60-80	Нормальное состояние, осень	6,2
400	Нормальное состояние, осень	7,8
20	60 дней голодания	1,7
180	60 дней голодания	2,1
Производитель	Перед созреванием	10,0

*по системе единиц (СИ) выражается в г/л. Например, 3,0 г% по старой системе соответствует 30 г/л по новой.

Определение белковых фракций (альбуминов и глобулинов) рефрактометрическим методом. Уменьшение альбуминов в сыворотке крови наблюдается при дистрофии. Повышение глобулина - при инфекционных заболеваниях. У сеголетков и двухлетков карпов с хорошей кондицией альбуминов не менее 22%.

Оборудование и реактивы: рефрактометр, центрифуга, водяная баня, аммоний сернокислый - (NН₄)₂SO₄, центрифужные пробирки.

Ход определения: готовят насыщенный раствор сернокислого аммония путем растворения 80 г его кристаллов в 100 мл горячей дистиллированной воды, фильтруют и для перенасыщения колбу ставят на 15-20 мин в воду с температурой 18-20^оС. Чтобы убедиться в том, что насыщенный раствор приготовлен правильно, из него готовят полунасыщенный раствор путем смешивания с дистиллированной водой в равных соотношениях (1:1). Показатель преломления правильно приготовленного раствора должен быть равен 1,370. Если такого значения не получается, то насыщенный раствор следует приготовить заново.

Смешивают полученную сыворотку крови с насыщенным раствором (NН₄)₂SO₄ 1:1 (точно), смесь центрифугируют 8-10 мин. Цетрифужные пробирки должны быть закрыты резиновыми пробками во избежание испарения золы, которое может привести к завышенным данным (удобно пользоваться предлагаемыми нами стандартными полихлорвиниловыми трубочками). После центрифугирования глобулины находятся в осадке, над ними в прозрачной жидкости - альбумины и (NH₄)₂SO₄ . Помещают 1-2 капли центрифугата в камеру прибора и учитывают показатель преломлений - n. . Затем измеряют показатель преломления цельной сыворотки крови – n₂ (табл.54).

Расчет содержания альбуминов и глобулинов. Содержание альбуминов (%) в исследуемой пробе находят по табл. 55, в которой представ­лен также показатель преломления дистиллированной воды, альбуминов и небелковых веществ – n_3. Содержание глобулинов устанавливают расчетом. Для этого из показателя преломления цельной сыворотки крови – n₂ вычитают показатель n₃, а полученную разность делят на 0,00229 (показатель 1%-аого раствора глобулинов) и получают про­центное содержание глобулинов.

Отношение содержания альбуминов к содержанию глобулинов показывает белковый коэффициент: К= А/Г

Отмечается, что увеличение количества глобулинов и уменьшение количества альбуминов в сыворотке крови сопутствует ускорению СОЭ.

Таблица 54

Зависимость между показателем преломления и концентрацией белка в сыворотке крови

Показатель преломления с точностью до тысячной n2	Концентрацией белка (%) при показателе преломления с точностью до десятитысячной
	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9
1,337	0,60	0,66	0,72	0,77	0,83	0,89	0,95	1,01	1,07	1,12
1,338	1,18	1,24	1,30	1,36	1,41	1,47	1,53	1,59	1,65	1,70
1,339	1,76	1,82	1,88	1,94	2,00	2,05	2,11	2,17	2,23	2,29
1,340	2,34	2,40	2,46	2,52	2,58	2,63	2,69	2,55	2,81	2,87
1,341	2,93	2,98	3,04	3,10	3,16	3,22	3,27	3,33	3,39	3,46
1,342	3,51	3,57	3,62	3,68	3,74	3,80	3,86	3,91	3,97	4,03
1,343	4,09	4,15	4,20	4,26	4,32	4,38	4,44	4,50	4,55	4,61
1,344	4,67	4,73	4,79	4,84	4,90	4,96	5,02	5,08	5,13	5,19
1,345	5,25	5,31	5,37	5,43	5,48	5,54	5,60	5,66	5,72	5,77
1,346	5,83	5,89	5,95	6,01	6,07	6,12	6,18	6,24	6,30	6,36
1,347	6,41	6,47	6,53	6,59	6,65	6,70	6,76	6,82	6,88	6,94
1,348	7,00	7,05	7,11	7,17	7,23	7,29	7,34	7,40	7,46	7,52
1,349	7,58	7,63	7,69	7,75	7,81	7,87	7,93	7,98	8,04	8,10
1,350	8,16	8,22	8,27	8,33	8,39	8,46	8,51	8,57	8,62	8,68
1,351	8,74	8,80	8,86	8,91	8,97	9,03	9,09	9,15	9,20	9,26
1,352	9,32	9,38	9,44	9,50	9,55	9,61	9,67	9,73	9,79	9,84
1,353	9,90	9,96	10,02	10,08	10,13	10,19	10,25	10,31	10,37	10,43
1,354	10,40	10,54	10,60	10,66	10,72	10,77	10,83	10,89	10,95	11,01

Таблица 55

Определение альбуминов в сыворотке крови

Показатель преломления центрифугата сыворотки крови, n1	Альбумины,%	Показатель преломления дистилированной воды альбуминов и небелковых тел, n3	Показатель преломления центрифугата сыворотки крови, n1	Альбумины,%	Показатель преломления дистилированной воды альбуминов и небелковых тел, n3
1	2	3	4	5	6
1,3720	0,22	1,3363	1,3790	7,05	1,3497
1,3725	0,90	1,3374	1,3795	8,61	1,3510
1,3730	1,41	1,3384	1,3800	9,17	1,3520
1,3735	2,02	1,3393	1,3805	9,78	1,3531
1,3740	2,40	1,3400	1,3810	10,41	1,3542
1,3745	2,84	1,3408	1,3815	10,84	1,3550
1,3750	3,52	1,3420	1,3820	11,41	1,3560
1,3755	4,09	1,3430	1,3825	11,87	1,3565
1,3760	4,65	1,3440	1,3830	12,46	1,3578
1,3765	5,22	1,3450	1,3835	13,07	1,3589
1,3770	5,59	1,3457	1,3840	13,69	1,3600
1,3775	6,01	1,3464	1,3845	14,30	1,3611
1,3780	6,69	1,3476	1,3850	14,93	1,3622
1,3785	7,29	1,3487

Содержание гемоглобина в крови рыб. Гемоглобин это дыхательный белок красного цвета, содержащийся в эритроцитах. Его количество имеет важное диагностическое значение. В крови рыб оно, приблизительно, следующее (г%): у осетровых (стерлядь, севрюга, осетр) - от 8,3 до 10,8; у большинства пресноводных - от 9,2 до 11,0; у окуня, судака, щуки и леща колеблется от 4,0 до 8,5.

Понижение содержания гемоглобина указывает на угнетение кроветворения, что чаще всего является неблагоприятным признаком, но может служить также и показателем исключительно хороших кислородных условий.

Определение гемоглобина по Сали.

Оборудование и реактивы: гемометр Сали (ГС-3), капилляр с отметкой 0,02 мл, 0,1N-раствор соляной кислоты (8,2 мл НСl удельного веса 1,19 на 1 литр дистиллированной воды), дистиллированная вода.

Ход определения. Среднюю пробирку гемометра наполняют до нижней метки 0,1 раствором соляной кислоты. Набирают кровь в капилляр до метки (0,02 мл), не допуская попадания пузырьков воздуха и удаляют ее излишек путем прикладывания фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Осторожно выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают ее соляной кислотой из верхнего слоя. Посте этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по ее дну. Точно через 5 мин добавляют по каплям дистиллированную воду, жидкость перемешивают стеклянной палочкой, пока цветность не совпадет с цветом стандарта. Определяют количество гемоглобина в, г% по ниж­нему мениску. Если в гемометре имеется шкала, градуированная в ед. гемоглобина (за 100 ед. принимают 0,001 г-экв. гемоглобина, то есть 16.67г%), то полученный показатель следует разделить на 6.

Точность гемометра проверяют по образцам крови, содержание гемоглобина в которых определено на спектрофотометре или ФЭКе, или по новому прибору, не бывшему в употреблении.

Источники ошибок:

1.Искажение цвета соляно-кислого гематина, обусловленное количеством и характером плазменных белков.

2.Неточное соблюдение 5 мин выдержки перед началом разведения, т.к. гематиновая окраска со временем усиливается.

3.Выцветание стандартов.

4.Неточная концентрация НС1.

Примечание: равенство диаметров трех пробирок гемометра – непременное условие правильного определения гемоглобина. Проверка: при установке на горизонтальной поверхности все круговые метки должны находиться на одном уровне. В связи с этим нельзя заменять разбившуюся среднюю пробирку любой другой. Гемометр требует тщательного ухода. После работы капиллярную пипетку следует хорошо промыть водой, спиртом с эфиром, а затем высушить, продувая через нее воздух резиновым баллоном. После слива исследованной жидкости пробирку промывают водой и ополаскивают 0,1N раствором соляной кислоты. Гемометр хранить в закрытой коробке, чтобы предохранить стандарты выцветания.

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Скорость оседания эритроцитов зависит от химического состава и физических свойств крови. В норме у здоровых карповых и осетровых рыб СОЭ колеблется от 3 до 10 мм/ч. При воспалительных процессах и инвазиях СОЭ увеличивается.

Для определения СОЭ используют аппарат Панченкова, представляющий собой штатив, в который вертикально вставлены градуированные капилляры (миллиметровая шкала длиной 10 см) заполненные разбавленной кровью. Капилляры перед использованием промывают для предотвращения свертывания крови 5%-ным раствором трехзамещенного цитрата натрия. Раствор набирают в капилляр до отметки против деления 50 «Р» (реактив) и спускают на часовое стекло. Затем этим же капилляром дважды набирают кровь до верхней нулевой отметки – «К» (кровь) и спускают на то же стекло. Смесь хорошо перемешивают и вновь набирают в капилляр до отметки «К», не допуская попадания пузырьков воздуха. Капилляр ставят в штатив аппарата Панченкова на 1 ч, после чего отмечают высоту столбика жидкости в верхней части капилляра, освободившейся от эритроцитов, выражая результаты в мм/ч.

Определение осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ). Клетки крови приспособлены к обитанию в изотонической среде кровяной плазмы, которая изотонична 0,65%-ному раствору хлористого натрия. Если помешать эритроциты в более разбавленные растворы, то это является испытанием их осмотической устойчивости. При некоторой раз­бавленности раствора эритроциты лопаются. Осмотическая резистентность эритроцитов может служить показателем различных воздействий на организм. В норме эритроциты карпа выдерживают разбавление среды до 0,33-0,39% хлористого натрия. Действие токсикантов, а также болезней уменьшает резистентность эритроцитов. Наиболее простым является пробирочный способ определения ОРЭ. Для этого в ряде про­бирок готовят растворы хлористого натрия в уменьшающейся концентрации (от 0,80 до 0,20%) с таким расчетом, чтобы в каждой последующей пробирке концентрация раствора была на 0,02% ниже предыдущей.

Предварительно хлористый натрий химически чистый высушивают в эксикаторе до постоянной массы. Готовят 10%-ный раствор путем растворения в дистиллированной воде: 180 г NаС1, 27-31 г Nа₂HPO₄ и 4,86 г NаH₂РО_4*2H₂О. Объем доводят дистиллированной водой до 2 л (вода не должна бить кислой). Такой раствор можно хранить несколько месяцев. Из него перед употреблением готовят 1%-ный раствор, которого в первую пробирку наливают 0,80 мл, во вторую - 0,78 и так с интервалом 0,02 до 0,20 мл, а затем другой пипеткой доливают во все пробирки дистиллированную воду до 1 мл (отмеривать точно). В каждую пробирку, начиная с высоких концентраций, добавляют каплю крови. Чтобы капли были равные, необходимо взят пипетку от гемометра Сали, в которую кровь набирают до метки. После смешивания пробирки оставляют при комнатной температуре на 30 мин и затем снова встряхивают.

Там, где эритроциты растворились, жидкость становится ярко-красной и совершенно прозрачной. По мере нарастания концентрации соли, окраска слабее, т.к. там содержится часть негемолизированных эритроцитов. Первая прозрачная пробирка на границе с мутными пока­зывает максимальную резис-тентность. Пробирки с мутным содержимым центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об./мин. Там, где эритроциты не растворились, жидкость совершенно не окрашена, а где час­тично - желтоватый цвет. Первая пробирка с самым слабым окрашиванием показывает минимальную резистентность. Здесь растворяются самые неустойчивые эритроциты. Результаты ОРЭ выражаются в процентах (например, 0,42%).

Оценка полученных результатов

Сопоставление всех полученных сведений об анализируемой рыбе позволяет оценить ее общее состояние и при наличии нарушений выявить причины, которые могли вызвать те или иные нарушения. Для принятия рыбоводных, хозяйственных и организационных решений следует сопоставить физиолого-биохимическую информацию с рыбоводными данными, а также с данными ихтиопатологических исследований и гидрохимии. Необходимо учитывать эпизоотическую ситуацию, а также воздействие неспецифических факторов среды (загрязнение и др.) для правильного толкования полученных результатов.