Содержание жира в печени и мышцах растительноядных рыб

Рыба	Содержание жира, %
	в печени	в мышцах
Белый толстолобик 0+ 2+	2,420,09	1,230,04
	2,190,05	2,900,05
Пестрый толстолобик 0+ 2+	2,600,04	0,480,04
	4,050,04	1,350,04
Белый амур 0+ 2+	3,420,07	0,490,04
	10,280,06	2,420,04

Оборудование и реактивы: весы аналитические, ступка фарфоровая с пестиком, колба Бунзена, воронка Бюхнера, насос Комовского, стаканчики на 50-100 мл, сушильный шкаф, ацетон, сульфат натрия безводный.

Ход определения: арбитражным методом определения жирности является метод Сокслета, однако он слишком длительный и в некоторых случаях, например, при анализе икры рыб, дает заниженные результаты. Ниже приводится метод, основанный на экстракции ацетоном и отгонке ацетона.

Сеголетков массой до 10,0 г анализируют целиком. Более крупную рыбу измельчают, фарш хорошо перемешивают и берут навеску 5-10 г с точностью до 0,1 г.

Предварительно рыбу необходимо обсушить фильтровальной бумагой, взвесить и записать массу.

Рыбу, помещенную в фарфоровую ступку, измельчают ножницами, добавляют приблизительно равное по объему количество безводного сульфата натрия и хорошо растирают пестиком до однородной массы. Если масса получается мокрая, то следует добавить еще некоторое ко­личество сульфата натрия. Можно также для ускорения кристаллизации воды и обезвоживания ткани поставить ступку на 1 ч в холодильник при температуре 4-6°С.

Сухую массу из ступки ложкой переносят в стакан и заливают 2-3-кратным объемом ацетона. Стакан накрывают стеклом или пленкой для уменьшения испарения и оставляют на ночь для экстракции жира.

Содержимое стакана переносят ложкой на фильтр прибора для фильтрования. Прибор состоит из колбы Бунзена и воронки Бюхнера с хорошо пригнанным бумажным фильтром. Особенно удобно пользоваться специальным стеклянным фильтром в виде цилиндрической воронки с вваренной пористой стеклянной пластинкой. Отрицательное давление в колбе Бунзена создается насосом Комовского или водоструйным насосом. После того, как весь ацетоновый раствор жира стечет в колбу, стакан ополаскивают новой порцией ацетона и также пропускают его через воронку. Общий объем ацетона должен в 5-10 раз превышать количество взятой на анализ рыбы.

Ацетон переливают из колбы Бунзена в мерный цилиндр и записывают полученный объем. Из этого объема берут пипеткой 20-30 мл и наливают в предварительно взвешенный стаканчик.

Стаканчик с ацетоновым раствором жира выпаривают в сушильном шкафу до исчезновения запаха ацетона.

После отгонки ацетона стаканчик остужают в эксикаторе взвешивают. Для взвешивания стаканчика с жиром и без жира требуются точные аналитические весы (например, ВЛА-200), т.к. взвешивает­ся, как правило, не более 100 мг жира. Успех анализа прежде всего зависит от точности взвешивания.

Расчет жирности:

масса стакана _ масса пустого объем всего

с жиром, г стакана, г * ацетона, мл

Жирность, %-----------------------------------------------------------------*100

навеска рыбы, г * объем ацетона, взятого

для отгонки

Содержание белка в теле рыбы может меняться в зависимости от целого ряда причин. При истощении количество белка в теле уменьша­ется прежде всего из-за обводнения ткани. Но содержание белка может несколько уменьшаться и благодаря повышению жирности. Поэтому этим признакам следует пользоваться осторожно, учитывая другие по­казатели общего химического состава.

Определение белка. Арбитражным методом является метод Къельдаля, при котором навеску ткани сжигают в серной кис­лоте, определяют азот и по этому показатели судят о содер­жании белка в теле рыб. Метод Къельдаля требует навыка и акку­ратности. Более прост описываемый ниже метод определения белка «по разности». Поскольку рыба состоит на 70-90% из воды, 1-10% жи­ра, 1,5-3% минеральных веществ и 9-17% белка, то при наличии данных о сухой массе и жирности для определения белка достаточно сделать анализ на содержание в теле золы. Метод дает несколько завышенные данные (в среднем в 1,14 раза) по сравнению с методом Къельдаля, но т.к. ошибка будет постоянной, то получаемые результаты будут сравнимы и вполне приемлемы для практического рыбоводства. Расчет содержания белка, %:

Белок = сухое вещество - жир - зола

Довольно точно отражает содержание белка в теле карпа также со- держание сухого вещества. Для такого определения можно пользовать­ся результатами, представленными на графике.

Содержание золы в теле рыбы имеет возрастную динамику, которая заключается в повышении зольности по мере роста.

При истощении содержание золы в теле увеличивается. Низкое содержание золы в теле и в костях может указывать также на недостаток фосфора в рационе.

Содержание золы определяют весовым способом. Навеску помещают в взвешенный фарфоровый тигель, взвешивают и сжи­гают в муфельной печи 500-700°С. Сжигать можно навеску сухого вещества (порядка 0,5 г) или навеску сырого вещества (2-3 г). Сжи­гание производят до превращения ткани в светлую, иногда слегка окрашенную золу. Взвешивание проводят на аналитических весах.

Расчет содержания золы при сжигании сырого вещества:

(масса тигля с золой, г – масса пустого тигля, г)

Зола = ----------------------------------------------------------------- * 100%

навеска сырой ткани, г

Содержание гликогена в тканях рыб. Высокое содержание гликогена в организме рыб, особенно в печени, как правило, является благоприятным признаком. Однако повышенное содержание гликогена в печени может указывать на высокое содержание в кормах углеводов (табл.51).

Таблица 51

Содержание гликогена в тканях рыб, %

Масса, возраст, условия и особенности содержания рыбы		Гликоген, %
Печень
Карп 0+, нормальное состояние		8
Карп, нормальное состояние
Лето	4,81,3
Осень	9,20,14
Декабрь	15,50,66
Мышца белая
Лето	0,660,1
Осень	0,360,03
Декабрь	0,440,06
Мышца красная
Осень	1,100,13
Декабрь	1,500,10
Печень
Карп 30-40 г
голодание, февраль-май	1,400,20
подкормка, февраль-май	4,200,90
15 дней карповый корм	1,600,60
после 3 месяцев голодания
15 дней форелевый корм	3,401,70
40 дней карповый корм	10,400,70
40 дней форелевый корм	2,801,10
Карп 15-25 г
нормальное состояние	8,501,27
2 дня голодания	12,201,20
10 дней голодания	8,801,70
22 голодания	10,701,80
100 голодания	1,600,40
44 дня корм 90% углеводов	12,302,30
50% углеводов	9,800,90
10% углеводов	8,001,60
Форель 2+
чистая вода	1,7
грязная вода	0,6

При высоком содержании гликогена в пробе определение проводят «прямым» методом. Если гликогена в пробе мало, что можно ожидать у истощенной рыбы, его предварительно осаждают спиртом – «непрямой» метод, т.к. цветную реакцию с антроном дают также продукты гидролиза белка.

Оборудование и реактивы: фотоэлектроколориметр, антрон - 0,2%-й раствор, приготовленный на 95%-ном растворе х.ч. серной кислоты (раствор готовят в день определения), глюкоза - стандартный раствор (1 мл содержит 40 мкг глюкозы); КОН – 30%-ный раствор; этиловый спирт.

Определение гликогена.

«Прямой» метод. В пробирки, содержащие 25-100 мг печени, добавляют 3 мл З0%-ного КОН, закрывают пробками и 20 мин выдерживают на кипящей водяной бане, охлаждают и разводят до 25-50 мл дистиллированной водой. 2 мл полученного раствора смешивают в пробирке с 4 мл антронового реактива и в течение 10 мин нагревают на кипящей водяной бане, затем охлаждают в холодной воде. Проявившуюся сине-зеленую окраску фотометрируют с красным фильтром (620 нм) против холостой про­бы (окраска стабильна при комнатной температуре в течение несколь­ких часов). Такую же цветную реакции проводят с раствором глюкозы разных концентраций для построения калибровочного графика. Между концентрацией и оптической плотностью сохраняется прямолинейная зависимость для концентраций глюкозы 0,1-1,5 мг/мл. Для расчета содержания гликогена найденное по калибровочному графику количество глюкозы делят на коэффициент 1,11, который отражает отношение молекулярного веса глюкозы к молекулярному весу глюкозного остатка в гликогене.

«Непрямой» метод. В центрифужную пробирку берут 25-100 мг ткани, добавляют 3 мл 30% КОН, нагревают 20 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения добавляют 4 мл этилового спирта, хорошо перемешивают и вновь нагревают в водяной бане, пока спирт не закипит. После охлаждения отделяют осадок гликогена центрифугированием в те­чение 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, осадок растворяют в 1 мл дистиллированной воды и снова повторяют осаждение равным объемом спирта. Осадок растворяют в 2 мл дистиллированной воды, добавляют 4 мл антронового реактива. Далее ход определения, как при «прямом» методе.