Микроскопическое исследование эякулята

И.И.Миронова, Л.А.Романова, В.В.Долгов  Российская медицинская академия последипломного образования

Микроскопическое исследование спермы

Микроскопическое исследование эякулята проводится после полного его разжижения. Оно включает в себя:

• обнаружение в нативном препарате сперматозоидов, определение характера их движения (кинезиограмма), присутствие "круглых клеток", агглютинации, агрегации сперматозоидов, кристаллов спермина, слизи;

• подсчет количества сперматозоидов, лейкоцитов и клеток сперматогенеза в камере Горяева или в других специальных счетных камерах (камера Меклера);

• проведение дифференциальной диагностики живых и мертвых сперматозоидов;

• изучение морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза, лейкоцитов и эпителия в окрашенных препаратах;

• обнаружение в этих препаратах трихомонад;

• обнаружение в препаратах, окрашенных по Граму грамотрицательных диплококков.

Согласно рекомендациям ВОЗ, микроскопическое исследование эякулята следует проводить в 2 этапа в световом микроскопе.

На I этапе в нативном препарате или счетной камере оценивается подвижность сперматозоидов, составляется кинезиограмма. Решается вопрос о наличии агглютинации и агрегации сперматозоидов, слизи и других клеточных элементов.

На II этапе в счетной камере определяется количество сперматозоидов в 1 мкл спермы с пересчетом на их концентрацию в 1 мл эякулята и в объеме полученной спермы. Затем в препаратах, окрашенных по Блюму (суправитальная окраска), оценивается количество живых и мертвых сперматозоидов (жизнеспособность сперматозоидов).

В препаратах, окрашенных азур-эозином или другими красителями, оценивается морфология сперматозоидов, клеток сперматогенеза, лейкоцитов, эпителиальных клеток, трихомонад и элементов простатического сока.

Дополнительные исследования сперматозоидов - это выявление антиспермальных антител, определение индексов множественных дефектов сперматозоидов, тест на гипоосмотическое набухание, посев эякулята и биохимический анализ, определяющий функции придаточных половых желез.

В настоящее время в практику вводятся научные разработки, позволяющие, в частности, определять свободные радикалы в сперме, оценивать акросомальную реакцию и проводить компьютерный анализ морфологии сперматозоидов.

Метод приготовления нативного препарата

На предметное стекло полуавтоматической пипеткой с наконечником разового пользования или пастеровской пипеткой разового пользования наносится капля тщательно размешанного эякулята. Объем капли должен быть фиксированным и составлять 10 мкл, так же как и размер покровного стекла (22x22 мм).

Под тяжестью покровного стекла эякулят равномерно и однослойно распределяется по поверхности предметного стекла, обеспечивая стандартную толщину около 20 мкм и оптимальный обзор препарата. В приготовленном препарате между покровным и предметным стеклами не должно быть пузырьков воздуха. Стабилизация препарата происходит в течение 1 мин. Не следует сильно прижимать покровное стекло, так как при толщине препарата менее 20 мкм возможны нарушения вращательных движений сперматозоидов. Исследование спермы следует проводить при постоянной температуре в лаборатории не ниже +20 °С, обеспечивающей стабильные результаты при оценке подвижности сперматозоидов.