Вопрос 61. Лабораторная диагностика малярии

/. Обнаружение плазмодиев в толстой капле и мазке крови

2. Морфология малярийных паразитов в мазке и толстой капле

3. Ошибки диагностики

4. Исследование комаров на зараженность малярийными паразитами

1. Паразитологический диагноз малярии основан на обнаружении паразитов в окрашенных препаратах (толстая капля и мазок) крови. Паразиты могут присутствовать в крови не только во время лихорадочных приступов и промежутков между присту­пами, следующими один за другим, но и в течение длительных периодов, на протяжении которых не наблюдается повышения температуры.

Наличие паразитов в крови при отсутствии лихорадочных при­ступов называется паразитоносительством. Такие люди зараз­ны для комаров. При массовых обследованиях следует брать кровь вне зависимости от наличия приступов. Техника приготовления и окраски мазка — мазок готовят как обычно. После того как мазок высохнет, его фиксируют в 96%-ном этиловом спирте 15 мин или в метиловом спирте в течение 3 мин. Высушенные после фиксации мазки окраши­вают краской Романовского, разведенной дистиллированной водой, ркрашивают в течение 30—50 мин, в зависимости от качества краски. После окрашивания препарат споласкивают водой и высушивают на воздухе.

Техника приготовления и окраски толстой капли. На стекле при­готовляют мазок, а потом на еще влажный мазок дают упасть капле крови. Капля равномерно растекается, образуя круг. По­сле того как капля высохнет, на мазке простым карандашом делают соответствующую отметку. Препарат без фиксации ок­рашивают. Затем осторожно (чтобы не смыть каплю) препарат споласкивают водопроводной водой и высушивают. Мазки и толстые капли микроскопируют имммерсионной системой. 2. Морфология малярийных паразитов в мазке крови. Мерозоит, внедрившись в эритроцит, превращается в молодой шизонт, имеющий вид кольца. Затем паразит, увеличиваясь, принимает амебовидную форму, при этом сохраняется просвет (вакуоль) между ядром паразита и основной частью его цитоплазмы. В цитоплазме паразита появляются зерна пигмента. Амебовид­ный шизонт заполняет значительную часть эритроцита, затем начинает округляться, вакуоль исчезает (стадия подготовки к делению), пигмент начинает собираться в отдельные пучки. Для плазмодия малярии шизонты — лентовидные формы. Ядро паразита начинает делиться, а затем цитоплазма паразита де­лится так, что к каждому дочернему ядру прилегает отдельный комочек цитоплазмы (меруляция). В результате получается кучка мерозоитов — морула. Пигмент на стадии морулы собран в одну компактную кучу.

У пл. фальсипарум скучивание пигмента наступает еще до пол­ного формирования морулы. Мерозоиты расходятся, попадают в плазму крови, часть из них погибает, часть внедряется в но­вые эритроциты.

Гамонты. Форма гамонтов у всех малярийных паразитов, за исключением тропической малярии, круглая или слегка оваль­ная. При тропической малярии плазмодий имеет вытянутые гамонты с закругленными концами. Мужские и женские гамон­ты различаются между собой по величине и структуре ядра (интенсивности окраски цитоплазмы). Женские гамонты — яд­ро небольшое, компактное; цитоплазма красится в интенсив­ный голубой цвет. Мужские гамонты — ядро большое, цито­плазма красится бледно, часто зона вокруг ядра принимает фиолетовый оттенок.

Морфология малярийных паразитов в толстой капле. В толстой капле, поскольку ее окрашивают в нефиксированном виде, эритроциты выщелачиваются, а малярийные паразиты претер­певают значительную деформацию. При четырехдневной и тропической малярии пораженные эритроциты в толстой капле выщелачиваются полностью, так же как и нормальные. При трехдневной малярии в толстой капле строма эритроцитов со­храняется и диагностика малярийного паразита по толстой ка­пле облегчается. Кольца в толстой капле обычно смяты, вытя­нуты в виде восклицательного знака, иногда разорваны в виде запятой. Амебовидные шизонты часто бывают уплотненными, лентовидные шизонты четырехдневной малярии в толстой ка­пле округляются и неотличимы от амебовидных шизонтов. Морулы распознаются в толстой капле легко. Цитоплазма паразитов в результате воздействия химиотерапев-тических препаратов окрашивается слабее, приобретает стекло­видный оттенок, становится вакуолизированной, распадается на отдельные комочки, ядро становится рыхлым или, наоборот, более компактным. Иногда пигмент собирается в кучки, вы­талкивает из паразита. В толстых каплях распознавание таких подвергшихся деформации паразитов становится более труд­ным, а иногда и невозможным.

Серологическая диагностика малярии включает иммунофер-ментную агглютинацию, реакцию непрямой гемагглютинации и др., которые имеют наибольшее значение в неэндемичных районах.

3. В мазках крови и толстых каплях малярийные паразиты могут быть приняты за мерозоит, скопление бляшек может симули­ровать морулу. В препаратах, окрашенных по Романовскому, бляшки отличаются от мерозоитов по следующим признакам: мерозоит состоит из красного ядра и голубой цитоплазмы. Фон бляшки в мазке иногда окрашивается в бледно-голубой цвет, однако ее зернистость принимает красный цвет более светлого оттенка, чем у ядер мерозоитов.

В препаратах могут быть обнаружены также посторонние мик­роорганизмы, по форме напоминающие малярийных паразитов: грибки, одноклеточные водоросли, свободноживущие простей­шие. Некоторые одноклеточные формы с компактным ядром в центре, окрашивающимся по Романовскому в ярко-красный цвет, симулируют гамонты тропической малярии. Их легко от-, лйчить по отсутствию пигмента. Свободноживущие простей­шие с одним или несколькими жгутами могут быть приняты за стадию образования мужских гамет малярийного паразита.

4. Комаров вскрывают и определяют наличие ооцист на желудке и спорозоитов в слюнных железах. Ооцисты видны в нативных препаратах.

Незрелые ооцисты выглядят в таких препаратах как круглые гомогенные образования с пигментом, состоящим из несколь­ких глыбок.

В зрелых ооцистах видны хорошо сформировавшиеся споро-зоиты, тесно прилегающие друг к другу. Ряды спорозоитов в виде частокола располагаются по отношению друг к другу под разными углами, в результате чего ооциста приобретает моза­ичный вид, при надавливании покровного стекла из ооцист выходят спорозоиты.

В слюнных железах спорозоиты расположены рядами перпен­дикулярно к протоку слюнных желез, а также в виде конгло­мератов. В секрете слюнных желез спорозоиты попадают в ок­ружающую жидкость, в которой хорошо заметны вследствие их подвижности.