6 Группа. Возбудители микотоксикозов.

Заболевание вызвано попаданием в организм человека токсических продуктов метаболизма, образуемых плесниевыми грибами рода Aspergillus и Fusarium. Сущес­твует более 300 видов этих грибов. Клинически наблюдают острые симптомы отрав­ления в виде гастроэнтерита, может быть поражение крови ( тромбоцитопении) и поражение ЦНС. Токсины грибов могут быть на пищевых продуктах: зерно, арахис, фасоль, морковь, молоко, сыр. Токсин,выделенный из грибов, называют - афлаток- син. Есть и другие виды токсинов.

Лабораторная диагностика

Исследуемый материал: кожные чешуки, ногти,волосы, отделяемое слизистых кровь.

Микроскопический метод

Неокрашенные препараты. Используют метод висячей или раздавленной капли без предварительного окрашивания исследуемого материала. Обработка 10% ед­ким калием (КОН) ногтей и волос для визуализации элементов гриба, в которых КОН разрушает кератин волоса.

Окрашенные препараты. Окраска по Граму, по Романовскому - Гимзе по Леф- флеру.

Микробиологический метод.

Посев на агар Сабуро - пептонный агар с мальтозой, дрожжевой агар, МПА, кар- тофельно-декстрозный агар.

Микроскопическая и культуральная характеристика дерматофитов.

Epidermophyton floccosum - имеет один вид. Микроскопически: септированный мицелий, макроконидии как плод банана. Колонии слегка мучнистые, обратная сто­рона желтовато-коричневая.

Microsporum - включает 14 видов. Макроконидии толстостенные, есть микрокони­дии и хламидоспоры. Колонии гриба - пушистые, бархатистые, обратная сторона от светло-розового до коричневого цвета. Поражение волоса: споры мелкие, располо­жены беспорядочно, могут быть по типу эктотрикса и эндотрикса.

Trichophyton - включает 20 видов.Макроконидии толстостенные, многочислен­ные, микроконидии округлые, встречаются непостоянно. Мицелий септированный, ветвистый. Хламидоспоры округлые. Колонии гриба бархатисто-мучнистые, иногда кожистые. Обратная сторона колоний от светло-коричневого до красноватого цвета. Поражение волоса: споры крупные, заполняют волос ровными рядами по типу эк­тотрикса и эндотрикса.

Candida - включает более 10 видов. Микроскопия выявляет дрожжеподобные клетки и гифы.Хламидоспора -основной признак кандид. На питательных средах бе­ловато-розовые колонии, напоминающие капли майонеза.

Рост грибковых колоний регистрируют через 5-10 дней при температуре 28 - 30°С. Идентификация с помощью РИФ.Используют метод гибридизации нуклеиновых кислот.

Серологический метод

Иммуноферментная реакция( ИФА), реакция связывания комплемента( РСК) с це­лью серодиагностики.

Аллергический - метод кожных проб.

В настоящее время чаще используют для изучения иммунной прослойки в популя­ции при эпидемиологических исследованиях.

Биологический метод. Заражение морских свинок.

Лечение и профилактика.

Специфической профилактики не разработано. При тяжелых, системных микозах – амфотерицин В, гризеофульвин. При неосложненных формах – имидазолы (клотримазол, кетоконазол и др.).

#

Микробиологические аспекты лабораторной диагностики спирохетозов

Спирохетозы - заболевания, вызываемые спиралевидными, грамотрицательными микроорганизмами с разным количеством завитков, относящихся к царству про­кариот, семейству Spirohaetaceae, классу спирохет. В основе их строения лежит осе­вая нить - за счет ее вращения осуществляется их движение.Они не имеют клеточной стенки, не культивируются на питательных средах (лептоспиры могут культивировать­ся на средах сложного состава). По типу дыхания - анаэробы или микроаэрофилы.

Классификация спирохет

Принцип классификации	Основные роды
по количеству и характеру завитков	Treponema 8-12 ровных мелких завитков	Borrelia 3-10 неровных крупных завитков	Leptospira 15 -30 мелких ровных завит­ков на концах крючкообразно загнуты
по дифференциальной ок­раске (Романовкого -Гимзе)	бледно-розовые	сине-фиолето­вые	розовые
основные виды	pallidum	recurrentis	interrogans
болезни, которые они вы­зывают	сифилис (lues Venerae)	боррелиозы: эпидем и эндем возвратные тифы болезнь Лайма	желтушный и безжелтушный лептоспироз

Сифилис (билеты 23, 31) - хроническое венерическое заболевание с вариабельным, циклическим течением, затрагивающим все органы и ткани. Заболевание распространено повсе­местно.

Эпидемиология

Источник -больной человек. Основной путь передачи - половой и контактный. Особую опасность представляют лица на ранних стадиях заболевания: Возможна пе­редача инфекции -трансплацентарно.Лица в 3 стадию заболевания и в стадию ней­росифилиса практически теряют инфекционность.

Патогенез.

В организм возбудитель проникает через микротравмы слизистых ( половых пу­тей, прямой кишки,рта) или кожных покровов, затем мигрирует в лимфатические пути, кровоток и генерал изованно диссеминирует.

Спирохета-проходит несколько форм и стадий: 1 - внеклеточная (вирулентная) Нет клеточной стенки,выделяет ферменты агрессии для внедрения в ткани. Спира­левидное движение спирохеты и обусловливает ее высокую инвазивность, 2 стадия

стационарная -патогенетических факторов нет, появляется клеточная стенка, кото­рая является антигенным раздражителем, 3 стадия- внутриклеточная, цистоподоб­ная, высокая скорость размножения, клетка разрушается, 4 стадия - цисты возникает под влиянием химиопрепаратов. Иммунный ответ усиливается по мере развития ин­фекции, но не обеспечивает полную элиминацию возбудителя.Хроническое течение инфекции приводит к развитию не только гуморальной формы иммунного ответа, но и клеточной.Клинически это проявляется развитием гранулем ( по типу туберкулезных ГЗТ) в различных тканях, в дальнейшем возникают поражения ЦНС. Иммунитет после инфекции не развивается.Антитела являются свидетелями процесса.

Клиника.

Инкубационный период - в среднем 10 -20 дней. В месте внедрения трепонемы формируется твердый шанкр - язва с плотными краями. Начинается первичный пе­риод. Первичный аффект характеризуется папулой (болезненное уплотнение с плот­ными краями), затем поверхность ее некротизируется и образуется язва, содержа­щая трепонемы.

Вторичный период сифилиса - стадия диссеминации возбудителя, распростра­нение спирохет в организме.Неспецифические симптомы вторичного сифилиса раз­виваются обычно в интервале от 6 недель до 6 месяцев после инфицирования или спустя 1 -5 недель после появления первичного аффекта.Характерные симптомы: на коже и слизистых, особенно ротовой полости. Диссиминированная сыпь: папулезно- розеолезная (размером с чечевидное зерно) и пустулезная ( размером до монеты), розово-красные высыпания ( сифилиды). Может наблюдаться боль в горле ( кли­нически ангина) и генерализованная лимфаденопатия. В этой стадии все серологи­ческие реакции положительные. Проявления вторичного сифилиса могут спонтанно регрессировать, но могут и рецидивировать в течение года после инфицирования..

Третичный период - (при отсутствии лечения) наступает через 3-6 лет. В органах и костной ткани формируются гуммы в результате внедрения трепонем. Гранулемы могут рубцеваться - это вызывает повреждение органов и тканей с соответствующей клиникой. Эта стадия считается незаразной. Серологические реакции положитель­ные. В гуммах -при прямой микроскопии можно обнаружить трепонемы

Через 10 -20 лет развивается спинная сухотка, нейросифилис, прогрессирующий паралич.

При инфицировании плода развивается врожденный сифилис (клинически прояв­ляется: глухотой, бочкообразными зубами, саблевидными голенями).

Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал: кровь,отделяемое твердого шанкра, материал из высы­паний кожных покровов.

Микроскопический - бактериоскопия в темном поле -определяют под­вижность трепонем, окраска по Романовскому -Гимзе , окраска серебрением по Морозову, по Бурри-Гинсу,иммунофлюоресценция (РИФ) мазка со специфической флюорохромной сывороткой, реакция микроагглютинации с целью иммобилизации трепонем специфической сывороткой.

Микробиологический не используют, не растет на питательных средах.

Серологический. Определение антител в сыворотке крови больного, но не ранее чем 1 -4 недели после формирования шанкра

Нетрепонемные тесты. С кардиолипиновым антигеном ставят реакцию связыва­ния комплемента (РСК - реакция Вассермана), микропреципитацию кардиолипино- вого антигена с сывороткой больного, люес-тест с модифицированным кардиоли­пиновым антигеном ( содержит кардиолипин,лецитин и холестерол, производства фирмы «Dufko» США в стандартных пластиковых планшетах.

Трепонемные тесты со специфическим антигеном. Реакции: РСК, РИФ непрямая (иммунофлюоресценции) с тканевым штаммом трепонем, иммуноферментная реак­ция (ИФА), реакция пассивной гемагтлютинации (РПГА) с трепонемным эритроцитар- ным диагностикумом, Вестерн - блот( иммуноблотинг).

Аллергический не применяют.

Биологический не применяют.

Метод молекулярной биологии - полимеразная цепная реакция (ПЦР) использу­ют чаще при небольшом количестве трепонем.

Лечение и профилактика

Экстренная неспецифическая профилактика - антибиотики. Плановая не разра­ботана. Лечение антибиотики пенициллинового ряда.

#

БОРРЕЛИОЗЫ

Клещевые возвратные боррелиозы (билет 38) – группа природно-очаговых зоонозов. Путь передачи инфекции - через укусы членистоногих (вшей, клещей). К ним относят бо­лезнь Лайма (клещевой боррелиоз) и другие клещевые возвратные тифы. Путь пере­дачи инфекции - трансмиссивный. Род Borrelia насчитывает более 40 видов. Borrelia reccurentis вызывает эпидемический возвратный тиф (антропоноз). Borrelia duttonii - эндемический возвратный тиф.( зооноз) Источник антропонозных боррелиозов - больной человек,переносчик -платяная или головная вошь и даже клопы. Другие представители боррелиозов вызывают клещевые возвратные тифы и относятся к зоонозам. Бактерии сходны между собой не только по морфологии, но иногда и по серологическим критериям.

Эпидемиология

Источники инфекции - дикие животные, человек.Путь передачи - трансмиссив­ный через укусы вшей, клещей и других членистоногих.

Патогенез

Заболевание начинается с укуса переносчика и проникновения боррелий в кровь. Гибель микробов сопровождается выделением эндотоксина, действующего системно, что и вызывает симптомы интоксикации.

Клиника

Длительность инкубационного периода 5-14 суток. Заболевание начинается ост­ро, с лихорадки, головной боли, болей в мышцах различных групп, температура может достигать 40. Приступы лихорадки от 1-2 суток до нескольких часов. Прогноз благо­приятный. Иммунитета к повторному заражению не формируется.

Лабораторная диагностика

Исследуемый материал - кровь во время лихорадки, биоптаты кожи, цереброспи­нальной жидкости.

Микроскопический метод. Окраска мазков по Романовскому-Гимзе, микроско­пия в темном поле.

Микробиологический метод не применяют. Не растут на питательных средах.

Серологический метод определение антител в реакциях: иммуноферментная( ИФА), реакция связывания комплемента (РСК), Вестерн-блот (иммуноблотинг).

Аллергический метод не применяют

Биологический метод при зоонозных боррелиозах -заражение морских свинок и кроликов через конъюнктиву глаза или слизистую носа.Через 2-4 суток микроско­пия мазков крови животных.

Молекулярно-генетический метод ПЦР для идентификации возбудителя в иссле­дуемом материале.

Лечение и профилактика

Этиотропная терапия - тетрациклины, пенициллины и цефалоспорины. Экстрен­ной и плановой профилактики не разработано.

#

Лептоспироз (билет 6) - острая природно-очаговая зоонозная инфекция.

Эпидемиология

Источник - дикие и домашние животные (свиньи, крупный рогатый скот, собаки, грызуны). Возбудители выделяются с мочой,в воду и почву. Пути передачи -водный,

алиментарный, контактный. Инкубационный период -5 -12 дней.

Патогенез

В организм лептоспиры проникают через слизистые оболочки носа, рта, пищевода. микротравмы кожи. Возбудитель проникает в кровь. Лептоспиремия продолжается 4-5 дней со дня заражения и заканчивается концентрацией возбудителя в почках и печени. Поражение печени сопровождается повреждением гепатоцитов, а также ток­сическим действием эндотоксина. Клинически наблюдается желтуха. Этот симптом наблюдается также вследствие повреждения лептоспирамй эндотелия сосудов. Пов­реждения почечных канальцев вызывает анурию и уремию.

Клиника

Клиническая картина вариабельна от бессимптомных до тяжелых желтушных форм.

Безжелтушные лептоспирозы характеризуются лихорадкой, симптомами общей интоксикации, поражением конъюнктивы глаз, ярко-розовой сыпью на коже, сплено- мегапией, гепатомегалией,менингеальными признаками.Прогноз благоприятный.

Желтушный лептоспироз (болезнь Васильева - Вейля) - наиболее злокачественная форма, сопровождающаяся желтухой, геморрагиями на коже и слизитых.симтомами интоксикации, поражением центральной нервной системы. Летальность -35%

Лабораторная диагностика (в специализированных лабораториях)

Исследуемый материал: кровь, моча (после центрифугирования)

метол микроскопический. Микроскопия мазков в темном поле, окраска по Ро- мановскому-Гимзе.

метол микробиологический. Рост в жидких средах сложного состава с 10% кро­личьей сывороткой.

метол серологический. Определение антител в реакциях связывании компле- мента( РСК), микроагглютинации и лизиса с сывороткой пациента и набором микро­организмов, реакции пассивной гемагглютинации( РПГА) с эритроцитарным лептос- пирозным диагностикумом. Можно использовать парные сыворотки.

метод аллергический не применяют.

метола биологический. Внутрибрюшинное заражение морских свинок кровью больных в первые дни заболевания.

Молекулярно-генетический метол ПНР для обнаружения лептоспир в исследуе­мом материале.

Лечение и профилактика.

Этиотропная терапия - антибиотики пенициллинового ряда

Плановая профилактика по эпидпоказаниям проводится - феноловой поливален­тной вакциной с антигенами разных серогрупп лептоспир. Экстренной профилактики не разработано.

#

Микробиологические аспекты лабораторной диагностики инфекций, вызываемых внутриклеточно паразитирующими микроорганизмами

Хламидии (билет 15) - мелкие облигатные внутриклеточные грамотрицательные микроор­ганизмы, прокариоты, с характерным циклом развития, включающим две различные по морфологическим и биологическим свойствам формы существования: элемен­тарных и ретикулярных телец.

Не синтезируют энергетические субстраты АТФ и ГТФ, являются энергозависи­мыми паратрофами. Размножаются только в живых клетках хозяина. Клинические проявления хламидийной инфекции разнообразны и не обладают патогномоничными критериями, вызывают поражения органов зрения, дыхания, мочеполовой, нервной, сердечно-сосудистой систем, суставов.

Классификация.

На основании уникального цикла их развития эти микроорганизмы согласно юридической комиссии Международной Ассоциации Микробиологических обществ от 1.01 1980 года были выделены в самостоятельный порядок,включающий одно семейство,содержащее два рода, обьединяющее 3 основных вида, дифференциро­ваны на 15 сероваров.

Порядок: Chlamydialis

Семейство: Chlamydiaceae

Роды: Chlamydia Chlamydophila (вызывают заболевания у животных)

Виды: trachomatis pneumoniae psittaci

Заболевания:

- Chlamydia trachomatis: трахома, коньюнктивит (серовар А,В,С), урогенитальный хламидиоз и пневмония новорожденных (D-K), венерическая лимфогранулема (L1 ,L2L3) (тропическая болезнь)

- Chlamydia pneumonia: пневмония, бронхиты - Chlamydia psittaci: орнитоз (пситтакоз) (8 сероваров)

Эпидемиология.

Источник инфекции: больной человек, животное.

Пути передачи: половой, контактный, воздушно-капельный.

Патогенез.

Элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная внеклеточная форма (мелкие, сферические, полиморфные, метаболически малоактивные) адсорбируются на по­верхности чувствительных клеток - цилиндрического эпителия, стимулируя активный эндоцитоз. В результате вокруг ЭТ образуется фагоцитарная вакуоль. Хламидии пре­пятствуют слиянию фагосомы с лизосомой, способны подавлять процесс апоптоза клетки, что способствует их внутриклеточному выживанию и длительной персистенции. Внутри клетки из ЭТ развиваются ретикулярные (РТ) - более крупные, метаболи­чески активные, чувтвительные к антибиотикам, при делении образуют хламидийные включения.

В дальнейшем из РТ формируются ЭТ, выходящие из клетки путем экзоцитоза или лизиса клетки.