Практическая работа № 3 роль микроорганизмов-симбионтов в поддержании иммунитета

Цель работы - определить роль симбионтной микрофлоры в поддержании иммунитета, изучить представителей нормальной микрофлоры отдельных органов.

Оборудование и реактивы: микроскопы; иммерсионное масло; чашки Петри; ватные и стеклянные палочки; предметные стекла; набор реактивов для окрашивания по Граму; 1% раствор перекиси водорода; спиртовки; бактериологические петли.

Совокупность микробных биоценозов, встречающихся в организме здоровых людей, составляет нормальную микрофлору человека. Заселение бактериями различных частей тела, органов и систем организма начинается в момент рождения человека и продолжается на протяжении всей его жизни.

Формирование качественного и количественного состава нормальной микрофлоры регулируется сложными антагонистическими и синергическими отношениями между отдельными ее представителями в составе биоценозов.

Состав микрофлоры может меняться в зависимости: от возраста, от условий внешней среды, от условий труда и социальной сферы, от рациона питания, от перенесенных заболеваний, от травм, от стрессовых ситуаций.

Любой человеческий организм содержит две группы микроорганизмов:

1. Постоянная (резидентная или естественная микробиота) – стабильный состав, обычно обнаруживаются в определенных местах тела человека определенного возраста. После нарушений состав быстро спонтанно восстанавливается.

2. Транзиторная (временная микробиота) – не обитает постоянно, попадает на кожу или слизистые оболочки из окружающей среды, не вызывая заболеваний. Быстро отмирают.

Присутствие транзиторной микрофлоры определяется:

- поступлением микроорганизмов из внешней среды

- состоянием иммунной системы организма хозяина

- составом постоянной нормальной микробиоты

Однако если в составе нормального ценоза и/или в состоянии иммунной системы макроорганизма происходят изменения, транзиторные микроорганизмы могут вызывать заболевания – эндогенные инфекции.

Ход работы:

Подготовка к исследованиям

1. Обработка предметных стекол

Обезжирить предметные стекла, обработав их сухим хозяйственным мылом и натерев салфеткой. Проверить качество обезжиривания. Если стекло хорошо обезжирено, капля воды на нем равномерно растекается.

2. Обеззараживание предметных стекол

Стекло обеззараживают физическим способом, пронося обезжиренной стороной вверх 3 раза через пламя спиртовки.

3. Приготовление микропрепарата

4. Фиксация мазка

Полностью высохший мазок фиксируют физическим способом. Для этого мазок троекратно проводят через пламя горелки в течение 2 секунд мазком вверх.

Цели фиксации мазка: 1) закрепить микроорганизмы на стекле; 2) обезвредить микроорганизмы; 3) убитые микроорганизмы лучше окрашиваются.

5. Окраска мазка

Техника окрашивания по Граму:

Зафиксированный препарат положить на подставку над чашкой Петри

Нанести несколько капель генцианвиолета на 1-2 мин.

Не смывая водой, нанести раствор Люголя на 1 мин.

Слить красители

Нанести спирт на 30-60 секунд

Хорошо промыть препарат водой

Нанести несколько капель фуксина на 2-3 мин.

Хорошо промыть препарат водой, подсушить.

6. Микроскопирование

Приготовленный препарат просмотреть в микроскопе при увеличении 90х, с каплей иммерсионного масла.

Задание 1. Изучение микрофлоры зубного налета.

Записать методику приготовления препарата зубного налета. Приготовить микропрепарат. Промикроскопировать. Зарисовать видимое при большом увеличении. Сделать вывод о наличии кокков и палочек, грам(+) и грам(-) микроорганизмов. Повторить исследование после использования жевательной резинки и после еды (хлеб, мясо, сладкое). Зарисовать. Сравнить полученные результаты, сделать вывод.

Методика приготовления препарата: обезжирить предметное стекло. Обеззаразить его. В центр стекла нанести каплю воды. Стерильной стеклянной или ватной палочкой взять немного зубного налета, смешать с каплей воды. При помощи бактериальной петли приготовить мазок, растирая его круговыми движениями диаметром около 1 см. Высушить мазок и зафиксировать его. Приготовленный препарат окрасить по Граму.

Задание 2. Изучение микрофлоры слизистой щеки.

Записать методику приготовления препарата соскоба со слизистой щеки. Приготовить микропрепарат. Промикроскопировать. Видимое при большом увеличении зарисовать. Сделать вывод о наличии кокков и палочек, грам (+) и грам (-) микроорганизмов, о количестве и окрашивании эпителиальных клеток. Повторить опыт, обработав слизистую 1% раствором перекиси водорода или 60% спиртом. Сравнить полученные результаты, сделать вывод.

Методика приготовления препарата: обезжирить и обеззаразить стекло. Стерильной ватной палочкой сделать соскоб со слизистой внутренней поверхности щеки, этой же палочкой приготовить мазок на стекле без добавления воды, высушить и зафиксировать его. Полученный препарат окрасить по Граму.

Задание 3. Изучение микрофлоры кожи.

Записать методику приготовления препарата соскоба кожи. Приготовить микропрепарат. Промикроскопировать. Зарисовать видимое при большом увеличении. Сделать вывод о составе микрофлоры кожи. Повторить опыт, вымыв руки с мылом. Сравнить полученные результаты.

Методика приготовления препарата: обезжирить и обеззаразить предметное стекло. Влажной стеклянной палочкой сделать соскоб с ладонной поверхности кисти. Этой же палочкой сделать мазок в капле воды на предметном стекле. Высушить мазок, зафиксировать его, окрасить по Граму.

Задание 4. Изучить и записать микробиологические показатели, причины развития дисбактериоза, клинические проявления и фазы.

Дисбактериоз - это любые количественные или качественные изменения типичной для данного биотопа нормальной микрофлоры человека, возникающие в результате воздействия на макро- или микроорганизм различных неблагоприятных факторов.

Микробиологические показатели дисбактериоза:

- снижение численности одного или нескольких постоянных видов;

- потеря бактериями тех или иных признаков или приобретение новых;

- повышение численности транзиторных видов;

- появление новых, несвойственных данному биотопу видов;

- ослабление антагонистической активности нормальной микрофлоры.

Причины развития дисбактериоза:

- антибиотико- и химиотерапия;

- тяжелые инфекции;

- тяжелые соматические заболевания;

- гормонотерапия;

- лучевые воздействия;

- токсические факторы;

- дефицит витаминов.

Дисбактериоз различных биотопов имеет различные клинические проявления. Дисбактериоз кишечника может проявиться в виде диареи, неспецифического колита, дуоденита, гастроэнтерита, хронических запоров. Дисбактериоз органов дыхания протекает в форме бронхитов, бронхиолитов, хронических заболеваний легких. Основными проявлениями дисбиоза ротовой полости являются гингивиты, стоматит, кариес. Дисбактериоз половой системы у женщин протекает как вагиноз.

В зависимости от выраженности этих проявлений различают несколько фаз дисбактериозов:

1) компенсированная - когда дисбактериоз не сопровождается какими- либо клиническими проявлениями;

2) субкомпенсированная - когда в результате дисбаланса нормальной микрофлоры возникают ложные воспалительные изменения;

3) декомпенсированная - при которой происходит генерализация процесса с возникновением метастатических воспалительных очагов.

Лабораторная диагностика дисбактериоза.

Основной метод - бактериологическое исследование. При этом в оценке его результатов превалируют количественные показатели. Проводится не видовая идентификация, а только до рода.

Коррекция дисбактериоза: 1) устранение причины, вызвавшей дисбаланс нормальной микрофлоры; 2) использование эубиотиков и пробиотиков.