57. Биологические методы анализа. Применение в фарм. Анализе.

БМ – методы качеств. обнаружения и количеств. определения неорг. и орг. соединений, основанные на применении живых организмов в кач-ве аналит. индикаторов. Живые организмы всегда обитают в среде строго определенного хим. состава. Если нарушить этот состав, напр., исключив из питательной среды определяемый компонент или введя его дополнительно, организм через нек-рое время подаст соответствующий сигнал. В биологических методах анализа устанавливаются связи характера и (или) интенсивности ответного сигнала с кол-вом определяемого компонента. В кач-ве индикаторов применяются микроорганизмы (бактерии, дрожжи, плесневые грибы), водоросли и высшие растения, насекомые, а также ткани, разл. органы и системы теплокровных. Питательная среда м. б. естественной, искусственной или синтетической. Ответный сигнал индикаторного организма на нарушение хим. состава среды м.б. самым разнообразным. Напр., при применении микроорганизмов в кач-ве аналит. индикаторов исследуемый компонент можно определять по характеру и интенсивности пигментации и люминесценции (для фотобактерий), динамике накопления биомассы, диаметру зоны угнетения роста микробов, изменению электропроводности р-ров, рН, по качеств. составу и интенсивности газообмена и др. Все изменения оценивают визуально или измеряют с помощью приборов, напр. спектрофотометров, потенциометров, аналит. весов. Диапазон определяемых содержаний в-в, как и предел обнаружения, зависит от ряда факторов: направленности и продолжительности воздействия хим. соед. на организм, т-ры и рН среды и др. Предел обнаружения, как правило, понижается с увеличением продолжительности наблюдения за индикаторным организмом и повышением т-ры (до т-ры свертывания белка). Эксперимент может продолжаться до 40-50 сут. Биологические методы анализа отличаются высокой чувствительностью и избирательностью определения биологически активных в-в, напр. предел обнаружения тиамина с помощью бактерий Streptococcus salivarius составляет 1∙10^-5 мкг/мл. Кроме того, в ходе анализа можно получить информацию о воздействии определяемых в-в на жизнедеятельность организмов. Биологические методы анализа применяют для определения антибиотиков (эритромицин, канамицин), витаминов, аминокислот, большого числа продуктов орг. и неорг. синтеза, суммарные экстракты сердечных гликозидов, ядовитые вещества типа яда змей или пчел. Так токсичность яда пчел проводят на голубях и обозначают в голубиных единицах. Биологическую оценку эффективности препаратов наперстянки, горицвета, строфанта проводят на лягушках, кошках или голубях и выражают соответственно (ЛЕД) лягушачьи единицы действия, (КЕД) кошачьи единицы действия или голубиные единицы действия (ГЕД). Антибиотики, которые не удается охарактеризовать физико-химическими методами, или антибиотики, содержащие несколько действующих веществ (тобрамицин, канамицин) анализируют по зоне ингибирования роста тест-микроорганизмов на плотной питательной среде. Биологические методы используют также для оценки пирогенности растворов ЛС. В ГФ РБ используют микробиологический метод, основанный на подсчете общего числа микроорганизмов в исследуемой лекарственной форме до ее стерилизации. Биологическим методом проводят испытание на содержание веществ гистаминоподобного действия, испытания на токсичность.