2. Семейство кишечных бактерий. Общая характеристика семейства, состав, прин­ципы классификации. Использование тест-систем для ускоренной идентификации возбудителей кишечных инфекций.

Острые бактериальные кишечные инфекции — диареи — относятся к числу наиболее распространенных болезней. Их возбудителями являются многие виды бактерий, но наиболее часто — представители семейства Enterobacteriaceae.

1) единство морфологии — короткие, не образующие спор палочки с закруглен­ными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, не образующие или об­разующие капсулы;

2) отрицательная окраска по Граму;

3) ферментация глюкозы (и ряда других углеводов) с образованием кислоты и газа или только кислоты;

4) отсут­ствие, как правило, протеолитических свойств;

5) факультативные анаэробы или аэробы;

6) хорошо растут на обычных питательных средах;

7) место обитания — ки­шечный тракт и дыхательные пути;

8) фекально-оральный (в некоторых случаях - воздушно-капельный) путь заражения;

9) отсутствие цитохромоксидазы;

10) каталазопозитивны;

11) восстанавливают нитраты в нитриты;

12) хемоорганотрофы;

Семейство насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются роды: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Salmonella, Erwinia, Serratia, Edwardsiella, Shigella. Yersinia, Proteus, Morganella, Providencia.

Для дифференциации родов используют в основном биохимические признаки. Каждый род представляет собой компактную группу бактерий со сходны­ми биохимическими свойствами. В свою очередь деление на виды внутри родов так­же производят по биохимическим признакам и с учетом степени гомологии ДНК между представителями данного вида и у бактерий, представляющих разные виды.

В общей сложности для дифференциации родов и видов семейства используют бо­лее 40 различных признаков, в том числе: ферментация глюкозы, маннита, лактозы, сахарозы, рамнозы, образование H₂S, индола, рост на голодной среде с цитратом на­трия, гидролиз мочевины, декарбоксилирование орнитина, дегидрирование аргини­на, дезаминирование фенилаланина, подвижность, образование ацетоина при фер­ментации глюкозы (реакция Фогеса—Проскауэра), проба с метиловым красным (MR) и др.

Большое значение для классификации внутри родов и видов имеет изучение ан­тигенного строения.

В основу серологической классификации энтеробактерий поло­жено изучение их О-, Н- и К-антигенов.

Лучше всего для идентификации и дифференциации возбудителей ОКЗ (всех категорий) использовать тест-системы ПЦР (Полимеразная цепная реакция)

ПЦР имитирует естественный процесс репликации (размножения) ДНК, в результате чего, в течение нескольких часов из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в крошечных количествах.

3. Кишечная палочка, ее характеристика. Антигенное строение. Заболевания, вы­зываемые кишечной палочкой. Санитарное значение кишечной палочки.

Основной представитель рода Escherichia — Е. coli - перитрихи (или неподвижные), ферментируют лак­тозу с образованием кислоты и газа (или лактозонегативны), на голодной среде с цитратом не растут, реакция Фогеса—Проскауэра отрицательна, проба с MR поло­жительна, не имеют фенилаланиндезаминазы, не растут на среде с KCN.

Культуральные свойства. Е. coli — факультативный анаэроб, хорошо растет на обычных питательных средах — колонии на агаре круглые, выпуклые, полупрозрач­ные. Рост на бульоне в виде диффузного помутнения. Температурный оптимум для роста 37 С, растет в диапазоне от 10 до 45 °С, оптимальная рН 7,2—7,5. На всех дифференциально-диагностических средах колонии Е. coli. разлагающей лактозу, окрашены в цвет индикатора (на среде Эндо - темно-малиновые с металлическим блеском).

Биохимические свойства. Кишечная палочка способна ферментировать следующие углеводы с образованием кислоты и газа: глюкозу, лак­тозу, маннит, арабинозу, галактозу, иногда сахарозу и некоторые другие углеводы; образует индол; как правило, не образует H2S; восстанавливает нитраты в нитриты, не разжижает желатин, не растет на голодной среде с цитратом, дает положительную реакцию с MR и отрицательную — Фогеса-Проскауэра.

Антигенное строение.

Существует 164 группы по О-антигену и 55 серовариантов по Н-антигену.

Антигенная характеристика диареегенных E.coli включает в себя номера О- и Н-антигенов, на­пример, 055:116; 0157:Н7; О-антиген означает принадлежность к определенной серо- группе, а Н-антиген — ее серовариант. Всего в список диареегенных Е. coli включено 43 О-серогруппы и 57 ОН-серовариантов.

Е. coli используется в международных стандартах как показатель степени фекального загрязнения воды, особенно питьевой, и пищевых продуктов.

4.Пищевые отравлении, обусловленные стафилококками. Типы энтеротоксинов, их свойства, способы выявления.

Пища нередко является причиной отравлений, природа которых может быть са­мой различной.

Наиболее простая классификация пищевых отравлений такова: различают пище­вые отравления немикробного и микробного происхождения.

Пищевые отравления микробного происхождения подразделяют на 2 группы: пищевые интоксикации и пищевые токсикоинфекции.

Пищевые интоксикации — отравления, обусловленные исключительно токсина­ми микроорганизмов. Они могут возникать и в тех случаях, когда живые возбудите­ли в пищевом продукте, подвергнутом термической обработке, отсутствуют.

Пищевые токсикоинфекции возникают только в связи с употреблением в пищу продуктов, обильно зараженных бактериями.

Токсикоинфекции являются следствием массивного обсеменения пищевого про­дукта живыми возбудителями. Для пищевых токсикоинфекций существует только один путь передачи — через пищу.

Пищевые токсикоинфекции могут вызывать представители по крайней мере пя­ти семейств бактерий:

Enterobacteriaceae (роды - Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Serratia, Hafnia, Enterobacter, Citrobacter и др.),

Vibrionaceae (V. parahaemolyti- cus),

Pseudomonadaceae,

Streptococcaceae (протеолитические варианты стрептококков серогруппы D),

Bacillaceae — роды Bacillus (В. cereus),

Clostridium (С. perfringens, cepo- типы A, D, F; C. botulinum, серотипы А, В, С, E, F).

Инфицирование стафилококками пи­щевых продуктов — частая причина пищевых отравлений.

Основным методом диагностики пищевых токсикоинфекций является бактерио­логический. Он применяется с учетом биологии возможного возбудителя (грамот­рицательные и грамположительные палочки, стрептококки, бациллы, клостридии). Материалом для исследований служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, продукты, послужившие причиной отравления. Обращают внимание на обнаружение большого количества бактерий в продукте, таких же бактерий в выделениях из кишечника и желудка, в том числе от нескольких человек при групповом отравлении.

Подтверждением диагноза являет­ся обнаружение в сыворотке крови переболевших людей (через 1—2 нед.) антител к возбудителю.

5. Сальмонеллы - возбудители острых гастроэнтеритов. Классификация сальмонелл. Методы лабораторной диагностики сальмомеллезов.

Сальмонеллы являются не только основными возбудителями пищевых токсикоинфекций, но и часто причиной своеобразных диарей — сальмонеллезов.

Ключевые признаки рода Salmonella следующие: короткие грамотрицатель­ные палочки с закругленными концами, длиной 1,5—4,0 мкм, в большинстве случа­ев подвижные (перитрихи), спор и капсул не имеют, образуют при ферментации глюкозы кислоту и газ (за исключением S. typhi и некоторых других серотипов), имеют лизин- и орнитиндекарбоксилазы, не имеют фенилаланиндезаминазы, образуют H₂S.

Классификация. Род Salmonella включает единственный вид S. enteritica с семью основными подвидами: S. choleraesuis, S. salamae, S. ari­zonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. bongori, S. indica, которые различаются по ряду биохимических признаков

Серологическая классификация сальмонелл по Уайту и Кауффманну.

У сальмонелл имеются О-, Н- и К-антигены. Обнаружено 65 различных О-антигенов. Они обозначаются арабскими цифрами от 1 до 67. По О-антигену сальмонел­лы разделены на 50 серологических групп (A—Z, 51—65).

У сальмонелл различают два типа Н-антигенов: I фаза и II фаза. Обнаружено более 80 вариантов Н-антигенов I фазы. По Н-антигенам серогруппы разделяют на серотины.

Лабораторная диагностика.

Основной метод диагностики сальмонеллезной ин­фекции — бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, кровь, промывные воды желудка, моча, послужившие причиной отрав­ления продукты. Особенности бактериологической диагностики сальмонеллезов:

1. использование сред обогащения (селенитовой, магниевой), в особенности при исследовании испражнений;

2. для обнаружения сальмонелл пробы следует брать из последней, более жид­кой, части испражнений (верхнего отдела тонкого кишечника);

3. соблюдать соотношение 1: 5 (одна часть испражнений на 5 частей среды);

4. в связи с тем, что S. arizonae и S. diarizonae ферментируют лактозу, использо­вать в качестве дифференциально-диагностической не только среду Эндо, но и вис­мут-сульфит-агар, на котором колонии сальмонелл приобретают черный (некото­рые — зеленоватый) цвет;

5. для посева крови использовать среду Рапопорт;

6. использование для предварительной идентификации колоний 01-сальмонеллезного фага.

7. для окончательной идентификации выделенных культур вначале используют поливалентные адсорбированные О- и Н-сыворотки, а затем — соответствующие моновалентные О- и Н-сыворотки.

Для быстрого обнаружения сальмонелл могут быть использованы поливалентные иммунофлуоресцентные сыворотки. Для выявления антител в сыворотке крови боль­ных и переболевших используется РПГА с применением поливалентных эритроцитар- ных диагностикумов, содержащих полисахаридные антигены серогрупп А, В, С, D и Е.