19. Микробиоценоз полости рта. Облигатные анаэробы полости рта: значение в составе нормальной микрофлоры и участие в развитии патологических процессов. (см. Выше, вначале)

20. Бактероиды полости рта, видовой состав: значение в нормальной микрофлоре полости рта. Участие в развитии патологических процессов челюстно-лицевой области.

Бактероиды.В полости рта здоровых людей всегда присутствуют бактероиды - анаэробные грамотрицательные неспорообразующие палочки, относящиеся к семействуBacteroidaceae. Отличаются большим полиморфизмом - могут иметь палочковидную, нитевидную или кокковую форму. Большинство видов неподвижно. Растут на средах с добавлением белка (крови, сыворотки, асцитической жидкости). Ферментируют углеводы с образованием янтарной, молочной, пропионовой и других кислот.

Семейство Bacteroidaceae включает несколько родов. Обитателями полости рта являются представители родов Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas, Fusobacterium, Leptotrichia.

Положение в классификации представителей рода Bacteroides в последние годы существенно изменилось в связи с новейшими данными в хемотаксономии и молекулярной генетики. Согласно современной классификации в составе рода Bacteroides предложено оставить типовой вид B.fraqilis и близкие к ним, например,B.forsithus. Это мелкие, полиморфные грамотрицательные палочки, более интенсивно окрашиваются по полюсам. Большинство видов неподвижны, подвижные обладают перетрихиально расположенными жгутиками. B.forsythus рассматривается как один из пародонтопатогенов – вырабатывает специфические пептидазы, разрушающие тканевые структуры, обеспечивающие десневой аттачмент к зубу. В норме B.fraqilis не встречается в полости рта, но обнаруживается при гнойно-воспалительных заболеваниях (ГВЗ). В тоже время в полости рта постоянно присутствуют представители родов, выделенных из рода Bacteroides в соответствии с современной классификацией (темнопигментированные бактероиды - ТПБ). Наиболее распространенными являются Prevotella melaninoqenica, Porphyromonas gingivalis и др.

 

Род Prevotella

Впервые данные бактерии были изолированы в 1921 году Oliver и Wherry и классифицированы как Bacteroides melaninoqenicus. На сегодняшний день род Prevotella,элиминированный из рода Bacteroides, включает около полутора десятков видов, типичный представитель - Prevotella melaninoqenica. В ротовой полости также встречаются P.buccae, P.denticola, P.intermedia как представители нормальной микрофлоры, они же становятся причиной нагноительных процессов в челюстно-лицевой области, верхних дыхательных путях, реже – желудочно-кишечного тракта.

Это мелкие грамотрицательные палочки или коккобациллы, в молодых культурах могут окрашиваться по Граму положительно. На кровяном агаре формируют мелкие 0,5-2 мм в диаметре колонии, характеризующиеся ярко красной флуоресценцией в лучах ультрафиолетового цвета. После 5-14 дней инкубации флуоресценция исчезает и колонии приобретают темный пигмент – от коричневого до интенсивно черного.

Представители этого рода отличаются высокой сахаролитической активностью, продуцируют при метаболизме в больших количествах уксусную и янтарные кислоты в комбинации с другими жирными кислотами. Желатину не разжижают, каталазонегативные, чувствительны к желчи.

 

Род Porphyromonas

В этот род объединены асахаролитические виды бактероидов: P.assacharolyticus, P.gingivalis, P.endodentalis. Наличие в полости рта P.gingivalis связывают с некоторыми заболеваниями периодонта. Однако само название вида подразумевает их обычное обитание в десне или периодонтальном кармане. P.gingivalis редко выделяется из других отделов полости рта (язык, миндалины, слюна) и из неоральных очагов.

P.assacharolyticus очень широко распространен как среди людей, так и среди животных. Он выделяется из испражнений, цервикального канала, тканей уха, при эмпиемах, абсцессах и т.д. В полости рта он локализуется в чешуе зубов.

P.endodentalis был изолирован при оральных смешанных инфекциях, преимущественно из гнойных одонтогенных очагов или из инфицированных каналов зубов.

Морфология и тинкториальные свойства типичные для бактероидов: полиморфные грамотрицательные мелкие палочки. Оральные штаммы ТПБ в отличие от неоральных изолятов имеют капсулу, связанную с наружной мембраной, состоящую из полисахаридного гетерополимера. Большинство ТПБ имеют пили на своей наружной мембране. Субъеденица пилей – фимбрилин – имеет структуру, отличную от структуры пилей других грамотрицательных бактерий. Пили порфиромонад связывают с их гемагглютинирующей активностью. P.gingivalis может агглютинировать эритроциты разных животных. Это свойство является важным таксономическим критерием, который позволяет дифференцировать P.gingivalis от P.assacharolyticus и P.endodentalis. P.gingivalis обладает способностью прилипать к щечному и щелевому эпителию, а также к поверхности грамположительных бактерий. Сыворотка и слюна ингибируют адгезию P.gingivalis к эритроцитам и эпителиальным клеткам, но не нарушают прилипания к другим бактериям. Напротив, штаммы P.assacharolyticus вообще не адгезируются ни к эпителиальным клеткам, ни к поверхности грамположительных бактерий.

ТПБ имеют уникальную структуру липополисахарида (ЛПС) в отличие от других родов грамотрицательных анаэробных бактерий, у которых структура ЛПС сходна с таковой энтеробактерий. Показано, что ЛПС ТПБ проявляет слабую эндотоксическую активность. Однако, ЛПС P.gingivalis обладает значительной митогенной активностью. Цельные клетки P.gingivalis или его очищенный ЛПС стимулирует резорбцию костей и способен ингибировать образование коллагена в костях. Однако его роль как ингибитора синтеза костей недостаточно изучена. Показано также, что ЛПС P.gingivalis ингибирует пролиферацию десневых фибробластов, что ведет к деструкции покровных тканей, а также стимулирует продукцию интерлейкина-1.

Порфиромонады характеризуются неспособностью утилизировать многие известные углеводы. При ферментации других углеродсодержащих соединений образуют в больших количествах масляную кислоту, а также уксусную, пропионовую, изомасляную и изовалериановую летучие жирные кислоты (ЛЖК). Представители этого рода, особенно P.gingivalis, обладают выраженной протеолитической активностью, которая может обусловливать значительную деструкцию тканей и тем самым способствовать прогрессированию заболевания. P.gingivalis – единственный вид ТПБ, обладающий коллагеназной активностью. Разрушение коллагена другими видами бактероидов происходит под действием неспецифических протеаз, отличных от коллагеназы.

 

Количество бактероидов увеличивается при различных гнойно-воспалительных процессах ротовой полости (в нагноившихся зубных гранулемах, при остеомиелите челюстей, актиномикозе, а также при гнойно-воспалительных процессах в других органах - легких, почках и др). Нередко бактероиды обнаруживаются в сочетании с другими микроорганизмами, преимущественно анаэробными. B.fundiliformis продуцирует экзотоксин. При внутрикожном введении морским свинкам или кроликам вызывают некроз кожи. При внутривенном - септикопиемию с гнойными очагами в различных органах и тканях. У людей при снижении реактивности может вызывать тяжело протекающий "фундилиформис-сепсис" с образованием абсцессов в суставах, печени, легких, мозге. Входными воротами в этом случае могут являться миндалины и раневые поверхности, например, после экстракции зубов, при травматических повреждениях лицевых костей.

Бактерии рода Fusobacterium представляют собой веретенообразные палочки с заостренными концами. Неподвижны, не образуют спор и капсул. В цитоплазме содержат гранулы, которые окрашиваются грамположительно, тогда как сама цитоплазма - грамотрицательно. Обладают выраженной гемолитической активностью. Фузобактерии различаются по сахаролитической и протеолитической активности.

К сахаролитической группе относятся F.plauti и некоторые другие. Они сбраживают углеводы с образованием большого количества кислоты. Непатогенны для животных.

Протеолитические виды (F.nucleatum, F.biacutum) расщепляют белки с образованием сероводорода, культуры издают гнилостный запах. Иногда патогенны для животных (вызывают перитонит, абсцессы).

Фузобактерии (преимущественно F.nucleatum) постоянно присутствуют в полости рта (в 1 мл слюны содержится несколько десятков тысяч микробов). Их количество резко возрастает при различных патологических процессах (при ангине Венсана, гингивите, стоматите - в 1000-10000 раз). Фузобактерии находятся в кариозном дентине, в десневых карманах при периодонтите.

Бактерии рода Leptotrichia представляют собой крупные прямые или слегка изогнутые палочки с закругленными или чаще заостренными концами. Образуют нити, которые могут переплетаться друг с другом, объединяясь в септированные нити различной длины, в старых культурах они могут достигать 200 мкм. Неподвижны, не образуют спор и капсул, грамотрицательные. Облигатные анаэробы. Растут на средах с добавлением сыворотки или асцитической жидкости. Ферментируют углеводы с образованием молочной кислоты.

Известно большое количество видов лептотрихий, все они содержат общий антиген, который обнаруживается с помощью реакции связывания комплемента (РСК). В полости рта присутствуют постоянно и в большом количестве (10³ -10⁴ клеток в 1 мл слюны). Чаще локализуются у шейки зуба. Матрикс (органическая основа) зубного камня состоит главным образом из лептотрихий. Представителем лептотрихий - обитателей полости рта - является L.buccalis.

Для быстрой идентификации родов. Входящих в семейство Bacteroidaceae можно использовать газожидкостный анализ жирных кислот (таблица 1).

Таблица 1.

Газохроматографический анализ жирных кислот некоторых представителей

семейства Bacteroidaceae

Род	Янтарная кислота	Молочная кислота	Масляная кислота
Bacteroides	+	-	-
Fusobacterium	-	-	+
Leptotrichia	-	+	-