Глава 3. Результаты исследований
3.1 Культуральные и морфологические признаки
Культуральные признаки штамма Ochrobactrum (рис. 4) изучали визуально: рост по штриху – сплошной с ровным краем, колония светло-бежевого цвета, с ровным краем, поверхность колонии гладкая, профиль – бугристый, структура однородная, консистенция сметанообразная.
Рисунок
4.
Культуральные признаки штамма Ochrobactrum
Морфологические признаки – размер и форма клеток изучали при помощи окулярного микрометра. Штамм Ochrobactrum представляет собой палочки с параллельными сторонами и закругленными концами, как правило одиночные. Клетки примерно 0,6-1,2 до 2 мкм в длину.
3.2 Цитологические признаки
Определение грам-типа штамма Ochrobactrum определяли при помощи двух методов – окраски клеточной стенки по способу Грама (рис. 5) и экспресс-методом, с использованием 3 % раствора КОН.
Рисунок 5. Окраска по способу Грама
Окраска по способу грама показала, что изучаемая бактерия является грамотрицательной, повторный экспресс-метод подтвердил данные физиологические особенности: показав тянущийся за петлей след от исследуемой бактерии.
Так же штамм Ochrobactrum был подвержен окраске по Циль-Нильсону, дабы проверить свойства кислотоустойчивости. В результате, исследуемый штамм изменил окраску на красно-оранжевую, которая показала, что данный штамм является кислотоустойчивым.
Окраску жгутиков проводили с помощью двух методов – по методу Леффлера в модификации Пешкова и по методу Уварова.
Эксперимент по окраске доказал, что данный штамм является неспорообразующим организмом.
При проверки культуры на подвижность, были выявлены хаотичные движения бактерий, за счет перетрихиальных жгутиков (Рис. 6).
Рисунок 6. Перетрихтальные жгутики бактерии Ochrobactrum.
Для
обнаружения капсул, слизистых слоев и
чехлов, проводили окрашивание мазка по
методу Бурри-Гинса. В ходе эксперимента
было отмечено, что некоторые клетки
обладают слизистыми капсулами. (Рис.
7)
Рисунок 7. Капсула штамма Ochrobactrum
Окраска нуклеотида клеток не дала результата, так как окраски реагентом не происходило.
Гранулы гликогена (рис. 8) выявляли при окрашивании клеток штамма Ochrobactrum люголем.
Спустя некоторое время после окраски, в клетках бактерии были обнаружены красно-коричневые гранулы гликогена.
Рисунок 8. Гранулы гликогена
Окраску волютина осуществили при помощи двух способов – способа А и способа Б – метод Омелянского.
В ходе исследования, зёрна валютина в клетках не были обнаружены.
Окрашивание жировых включений в клетках штамма Ochrobactrum осуществили при помощи раствора Судана III (рис.9.).
Рисунок 9. Окраска жировых включений
В результате окрашивания цитоплазма клеток приобрела бледно-синий цвет, однако жировых включений выявлено не было.
Следующим шагом стало приготовление препарата под названием: «Агаровая пленка» (Рис. 10).
Рисунок 10. Препарат «микрокультура» (или «агаровая пленка»)
В ходе исследования, наблюдали развитие микроколонний штамма.
ВЫВОДЫ
Систематическое положение штамма Ochrobactrum sp. Относится к царству Bacteria, тип Proteobacteria, класс α-proteobacteria, порядок Rhizobiales, cемейство Brucellaceae, род Ochrobactrum.
Культуральные особенности изучаемого штамма: рост по штриху – сплошной с ровным краем, колония светло-бежевого цвета, с ровным краем, поверхность колонии гладкая, профиль – бугристый, структура однородная, консистенция сметанообразная.
По тинкториальному признаку клеточная стенка исследуемого штамма граммотрицательная.
Морфологические признаки штамма Ochrobactrum следующие: Род Ochrobactrum представляет собой палочки с параллельными сторонами и закругленными концами, как правило, одиночные. Клетки примерно 0,6-1,2 до 2 мкм в длину.
3. Штамм Ochrobactrum sp. некислотоустойчив, подвижен за счет перетрихиальных жгутиков, имеет внутриплазматические гранулы гликогена, не имеет спор, зерен валютина и жировых включений.
Список литературы
Нетрусов А. И. Практикум по микробиологии.–М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 608 с.
Сопрунова, О. Б. Учебно-методическое пособие «Общая бактериология. Методы цитохимических исследований». – Астрахань : Издательство АГТУ, 2006. – 64 с.
Теппер Е. З. Практикум по микробиологии. – М.: Дрофа, 2004. – 256 с.
Шадрина, О. И. Методические указания по проведению лабораторных работ по дисциплине «Цитология микроорганизмов» для студентов специальности 020209.65 «Микробиология» – Астрахань: Издательство АГТУ, 2007. – 32 с.
Егоров Н. С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М.: Издательство МГУ, 1995. – 224 с.
Определитель бактерий Берджи: [под ред. Дж. Хоулт]: [пер. с англ.].- М.: Изд. «Мир», 1980. - 495 с.
Patrick S. G. Chain, Dorothy M. Lang, Diego J. Comerci, Stephanie A. Malfatti, Lisa M. Vergez, Maria Shin, Rodolfo A. Ugalde, Emilio Garcia, Marcello E. Tolmasky. Genome ofOchrobactrum anthropi ATCC 49288T a Versatile Opportunistic Pathogen and Symbiont od Several Eukaryotic Hosts. Journal of Bacteriology 2011.
Adrian Kettaneh, Francois-Xavior Weill, Isabelle Poilane, Oliver Fran, Michel Thomas, Jean-Louis Herrmann, Laurent Hocqueloux. Septic Shock Caused by Ochrobactrum anthropi in an Otherwise Healthy Host. J. Clin Microbiol 2003.
Alnor D, Frimodt-Moller N, Espersen F, Frederiksen W. Infections with the Unusual Human Pathogens Agrobacterium Species and Ochrobactrum anthropi. Clinical Infectious Diseases 1994. doi: 10.1093/clinids/18.6.914
Mahmood MS, Sarwari AR, Khan MA, Sophie Z, Khan E, Sami S. Infective Endocarditis and Septic Embolization with Ochrobactrum anthropi: case report and review of literature. The Journal of Infection 2000.
Sara Romano, Fabian Aujoulat, Estelle Jumas-Bilak, Anges Masnou, Jean-Luc Jeannot, Envold Falsen, Helene Marchandin, Corinne Teyssier. Multilocus Sequence Typing Supports the Hypothesis that Ochrobactrum anthropi Displays a Human-Associated Subpopulation. BMC Microbiology 2009.
B. Holmes, M. Popoff, M. Kiredjian, M. Kersters. Ochrobactrum anthropi gen. nov., sp. nov. from Human Clinical Specimens and Previously Known as Group Vd. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 2012.
https://microbewiki.kenyon.edu
http://www.thewatchers.us
http://www.wikigenes.org
http://www.labome.org
https://www.researchgate.net