Вирус гепатита с (hepatitis с virus, hcv)

Принадлежит к семейству флавивирусов (Flaviviridae). Ко всем белкам вируса, включая гликопротеины оболочки, вырабатываются антитела, выявляемые в крови больных. Существование разных субтипов вируса определяется вариабельностью соотношения циркулирующих антител. Подобно другим флавивирусам, HCV при репликации образует иммунологически различающиеся антигенные варианты, которые обладают значительными возможностями адаптации и избегают иммунного надзора, что делает сложной разработку вакцины. Важной особенностью HCV является не только антигенная, но и генетическая неоднородность, обусловленная изменчивостью последовательности нуклеотидов с образованием различных генотипов и субтипов. Разные авторы выделяют от 4 до 30 генотипов HCV. Для клинической практики имеют значение 6 генотипов возбудителя вирусного гепатита C: 1a, 1b, 2а, 2b, 3а и 4. Отдельные генотипы HCV имеют различное географическое распространение. Для Японии и некоторых других стран Дальнего Востока характерны генотипы 1b (получивший название «японского генотипа»), 2а и 2b. В Северной Америке преобладает генотип 1а («американский»). В различных странах Европы преимущественно регистрируются генотипы 1 а и 1b. Для стран Ближнего Востока и Северной Африки характерен «египетский» генотип 4 (последняя разновидность HCV вызывает гепатит с неблагоприятным течением и переходом в хронические формы у 80-85% больных). Примечательно, что перекрестного иммунитета разные штаммы не дают.

По данным различных исследователей и по нашим наблюдениям, в России в последние годы главным образом выявлялся генотип 1b, обусловливающий относительно неблагоприятное течение вирусного гепатита C, высокое содержание HCV-PHK в сыворотке крови, низкую эффективность противовирусной терапии и высокую частоту осложнений. Вместе с тем, в настоящее время все чаще диагностируются разновидности 2а и 3а, что указывает на большую изменчивость HCV.

Генетическая неоднородность, большая изменчивость и внепеченочная репликация HCV в недоступных для иммунного надзора местах (лимфатические узлы, селезенка, моноциты) способствуют длительной персистенции вируса в организме, что является главной причиной высокой (50-80%) частоты перехода острого вирусного гепатита C в хронические формы. Механизмы неэффективной элиминации вируса изучены недостаточно; основное значение придается его изменчивости.

Лабораторная диагностика вируса гепатита c

Учитывая, что при HCV вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-HCV, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Таким образом, лабораторная диагностика HCV основывается на обнаружении серологических маркерв HCV: антител к HCV (анти- HCV, анти- HCV класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК- HCV методом ПЦР.

СКРИНИНГОВАЯ ДИАГНОСТИКА

С целью скрининговой диагностики HCV применяют определение так называемых общих антител к HCV (Anti-HCV), поскольку положительных результатов данного исследования ограничена - наличие общих антител к HCV позволяет лишь констатировать факт контакта пациента с вирусом гепатита С и не позволяет судить о давности процесса, а также о его прогрессировании или о завершенности (не может служить показателем выздоровления больного). Также не отмечается и корреляции с выраженностью клинического течения HCV-инфекции. Таким образом, обнаружение только общих антител к HCV дает основание для дальнейшего комплексного, в том числе специфического лабораторного обследования. (!) Общие антитела к вирусу гепатита С сохраняются в организме неограниченное время.

При положительном результате обследования пациента на антитела к HCV и отсутствии клинической картины гепатита необходимо направить пациента к инфекционисту. Для получения более полной характеристики следует провести дополнительное обследование: (1) биохимическое исследование крови (т. н. печеночные пробы - АЛТ, АСТ, ГГТП (g-глутамилтранспептидаза), холестерин, билирубин и т. д.); (2) раздельное определение антител к HCV; (3) исследование крови на РНК вируса (ПЦР) и при его обнаружении: определение генотипа и титра; (4) желательно также ультразвуковое исследование органов брюшной полости.

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА

Специфическая лабораторная диагностика HCV-инфекции основана на:

1. обнаружении специфических антител к основным антигенам вируса

2. определении РНК вируса, его количества и генотипа.

1. ОБНАРУЖЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ОСНОВНЫМ АНТИГЕНАМ ВИРУСА

Антитела класса IgG к вирусу гепатита С (анти-HCV IgG) свидетельствуют о возможной инфицированности HCV или перенесенной инфекции (определяются в скрининговых исследованиях). В свою очередь антитела класса IgG к ядерным белкам HCV (анти-HCV core IgG) свидетельствуют об инфицированности HCV или перенесенной инфекции.

Антитела класса IgM к HCV, определяемые иммуноферментным методом, позволяют говорить не только об инфицировании HCV, но с определенной долей достоверности об острой фазе инфекции или обострении хронического гепатита, несмотря на отсутствие симптомов болезни и гиперферментемии АЛТ, АСТ.

Следует отметить, что к настоящему времени разработаны четыре поколения тест-систем для выявления анти- HCV в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. Иммуноферментные тест-системы третьего поколения для определения антител к HCV, где в качестве связывающего антигена на твердой фазе используются иммунореактивные синтетические пептиды, являются достаточно чувствительными и информативными, а их широкое использование повысило процент выявления лиц, инфицированных HCV.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РНК ВИРУСА

Вирусная РНК выявляется в цитоплазме большинства гепатоцитов печени уже на первой-второй неделе заражения. В последующем количество вирусных частиц периодически может увеличиваться, но это не всегда коррелирует с наличием РНК в сыворотке крови или со степенью воспалительных изменений в печени. Максимально виремия наблюдается в начале острого периода болезни. Антитела появляются спустя 6–12 недель от начала развития гепатита. Прежде всего выявляются антитела к структурным (связанным с ядерным белком) протеинам, а затем - к неструктурным белкам - NS3, NS4 и NS5 регионов геномa.

Определение рибонуклеиновой кислоты HCV (или HCV-RNA) проводится с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции), которая позволяет с высокой степенью точности показать присутствие или отсутствие вирусной РНК в крови. Метод ПЦР позволяет определить вирусный генотип и его подтип, а также количество РНК (титр или количество генокопий в мл).

Определение генотипа HCV и его титра (т.н. полуколичественное исследование) в крови пациента используется как для диагностики HCV-инфекции, так и для дополнительной оценки активности вирусного процесса и для контроля эффективности комплексного, в том числе противовирусного лечения. Интерпретация полученных результатов ПЦР оценивается следующим образом: 1 + (1:1) и 2 + (1:10) - вирусная РНК определяется в низком титре, уровень виремии низкий, 3 + (1:100) - средний уровень виремии и наконец 4 + (1:1000) и 5 + (1:10000) - высокий уровень виремии.

Следует указать на то, что недостатком этого метода является его (!) технологическая сложность и достаточно высокие в настоящее время экономические затраты, что не позволяет широко внедрить его в массовое лабораторное обследование.