2. Материал и методы исследования

1. Реагенты

2. Для окраски препаратов гистологического анализа использовались следующие реагенты:

1. Гематоксилин

2. Эозин

3. Этиловый спирт

4. IsoPrep спирт

5. Био-клир, заменитель ксилола

6.БиоМаунт (синтетическая монтирующая среда для гистологических и цитологических препаратов)

7. HISTOMIX® - гомогенизированный гистологический парафин

3. Оборудование.

1. Термостат лабораторный ТС-1/20

2. Микротом санный МС-2

3. Нагревательный столик С900-ЕКА

4. Вытяжной шкаф «Ламо»

5. Микроскоп Leica DM – LB2

6. Стекла предметные с двусторонней матовой полосой

7. Покровные стекла

8. Гистологические кассеты

1.3 Методы исследования

Исследования были проведены на 10 взрослых (3-8 лет) овцематок казахской тонкорунной породы. В ходе эксперимента все животные находились в одинаковых стандартных условиях экспериментальной базы «Института экспериментальной биологии им. Ф.М. Мухамедгалиева». Объектом гистологического служили яичники овец казахской тонкорунной породы, полученные в эстральный сезон сентябрь, октябрь месяцах. Пробы органов (около 5-10мм в диаметре) фиксировали в 10% нейтральном формалине. При такой обработке предотвращается распад клеток и разрушение тканевой структуры под действием собственных клеточных ферментов и в процессе гниения, таким образом, сохраняется прижизненная структура и создается возможность полноценного изучения ткани. Фиксированные кусочки промывали в проточной воде в течение 24 часов, затем материал обезвоживали в спиртах возрастающей крепости. Кусочки яичников заливали парафином, и изготовляли на санном микротоме срезы толщиной 5 мк. Гистологическая обработка материала проводились традиционными методами микроскопической техники приготовления тонких срезов (Волкова, Елецкий, 1982).Срезы окрашивали гематоксилином – эозином. Просмотр и фотографирование гистологических препаратов осуществляли при помощи светового микроскопа Leica DMLS с цифровой камерой Leica DFS 280.

Индукция суперовуляции у овец

Для стимуляции суперовуляции были использован гормональный препарат: Плюсет (Pluset) - гонадотропный препарат, в состав которого входят гипофизарные гормоны – фолликулостимулирующий (ФСГ) и лютеинизирующий (ЛГ). Активность действующего вещества в 1 мл раствора - 50 МЕ фолликулостимулирующего гормона и 50 МЕ лютеинизирующего гормона.

Пргиготовление гистологических препаратов

Гистологическая и гистохимическая обработки материала включали ряд этапов:

1. Промывку проб изучаемых органов от формалина в проточной воде в течение 24 часов;

2. Обезвоживание проб органов в этиловом спирте восходящей крепости, а затем просветление их в смеси из равных частей ксилола и этилового спирта, по 45 минут в каждом растворе;

3. Последовательная пропитка проб органов при температуре 57-59º С в 3х порциях жидкого парафина (по 45-50 минут);

4. Изготовление парафиновых блоков проб изучаемых органов;

5. Приготовление парафиновых срезов толщиной 4-5 мкм из блоков на санном микротоме и их наклейка на предметные стекла;

6. Окрашивание срезов органов с использованием различных гистологических и гистохимических методик (гематоксилином и эозином, полихромными красителями по Массону и альциановым синим для выявления кислых мукополисахаридов.

Всего было изготовлено и окрашено более 250 гистологических и гистохимических препаратов. Изучение и микрофотографирование препаратов проводили на микроскопе Leica DM – LB2 при разных увеличениях.