Определение общего, свободного и этерифицированного холестерола по реакции Златкиса-Зака

На кафедре химии Кировской ГМА способ определения был модифицирован.

В основу определения общего, свободного и этерифицированного холестерола положен кинетический принцип, основанный на разных температурных режимах. При температуре +55-65°С хлорное железо вступает в реакцию и со СХС и ЭХС, в то время как при температуре +20°С хлорное железо в течение первых 2 часов реагирует только с СХС.

Реактивы:

1. Реактив Калиани-Златкиса-Зака. Готовят перед употреблением путем смешивания 3 частей раствора хлорного железа (FeCl₃) в ледяной уксусной кислоте (1 г/л) с 2 частями концентрированной серной кислоты («х.ч.» или «выдерживающей пробу Саваля»). Хранят в бутыли с притертой стеклянной пробкой (для предохранения содержимого от влаги и воздуха).

2. Стандартные растворы холестерола в изопропаноле для построения калибровочного графика.

Ход определения

В пробирки (опытную и контрольную) вносят 2,0 мл реактива Калиани-Златкиса-Зака. К содержимому опытной пробирки добавляют 0,02 мл сыворотки (плазмы) крови. Через 1 ч (60 мин) выдерживания пробы при комнатной температуре (20 °С) содержимое опытной пробирки колориметрируют при длине волны 570 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против контрольной пробы. За указанное время реагирует лишь СХС. Затем пробирки помещают точно на 1 мин (60 сек) в кипящую водяную баню и по извлечении из нее сразу же охлаждают в холодной водопроводной воде (при температуре кипящей водяной бани в сильнокислой среде происходит гидролиз эфиров холестерола и освобождаемый продукт моментально взаимодействует с реактивом с образованием окрашенного соединения). Устанавливают электрический ноль фотометрического прибора по подвергнутой прогреванию контрольной пробе и снова фотометрируют опытную пробу в аналогичных условиях. Из второго результата определения абсорбции, отражающей содержание ОХС, вычитают первый и тем самым находят абсорбцию, приходящуюся на ЭХС. Перевод показателей абсорбции в абсолютные цифры производят по калибровочному графику. Коэффициент этерификации рассчитывают по приведенному выше способу.

5. Транспортные формы липидов

5.1 Липопротеины (лп) плазмы крови и их классификация

Основными липидами плазмы крови человека являются свободные жирные кислоты (СЖК), ТАГ, фосфолипиды (ФЛ), свободный холестерол (СХС) и его эфиры (ЭХС).

Плазменные липиды в воде не растворимы, поэтому в крови находятся в связанной с белками форме. СЖК связаны с альбумином, а остальные липиды образуют с альфа- и бета-глобулинами так называемые липопротеиновые комплексы (липопротеины).

В процессе функционирования в кровеносном русле ЛП постоянно обмениваются своими составными частями (липидами и белками) между собой и с другими структурами организма, что сопровождается частичным или полным взаимопревращением липопротеинов. На основании этого можно заключить, что липопротеины - это единая функциональная система, осуществляющая транспорт липидов и находящаяся в состоянии динамического равновесия.

Значение главных компонентов ЛП: ТАГ, СХС и ЭХС - это транспортируемые составные части: ФЛ - преимущественно посредники растворения, а белки (апопротеины) являются основными компонентами определяющими специфичность структуры и свойства различных ЛП.