48. Векторы на основе вирусов животных (ретровирусов, полиомавирусов) и их использование в генотерапии.
49. Принципы картирования геномов вирусов. Физические и генетические карты.
Революцию в физическом картировании геномов вирусов произвело применение рестриктаз и секвенирование вирусных геномов. Рестриктазы - ферменты участвующие в генетических процессах, в отличие от экзонуклеаз, отщепляющих концевые нуклеотиды или свободные остатки фосфорной кислоты, эндонуклеазы расщепляют молекулу ДНК изнутри. Характеризуются высоковыраженной специфичностью, распознавая строго определенные последовательности нуклеоидов в двунитчатойДНКтание . Сочетание рестрикционного анализа с дугими методами позволяет составить физические карты геномов вирусов. Физические катры вирусных геномов обозначают взаимное расположение генов, их границы, локализацию начала репликации, промоторов, лидеров, экзонов и интронов, сигнальных последовательностей и других генетических элементов.
Тест рекомбинации применяют для генетических исследований вирусов. С его помощью возможно построение генетических карт вирусов, в которых определяется, в каких участках геномов произошли мутации, а также в условных единицах измеряется расстояние между разными мутациями.
50. Методы изучения взаимодействия вирусов с клетками (физические, биохимические, генетические)
Вирусологические методы исследования – методы изучения биологии вирусов и их идентификации. В вирусологии широко используются методы молеккулярной биологии, с помощью кот. Удалось установить молекулярную стр-ру вирусных частиц, способы пронгикновения их в клетку и особенности репродукции вирусов, первичной структуры вирусных нуклеиновых кислот и белков. Развиваются методы определения последовательности составляющих элементов вирусных нуклеиновых кислот и аминокислот белка. Появляется возможность связать функции нуклеиновых кислот и кодируемых ими белков с последовательностью нуклеотидов и установить причины внутриклеточных процессов, играющих важную роль в патогенезе вирусной инфекции. Вирусологические методы исследования основаны также на иммунологических процессах (взаимодействие антигенов с антителами), биологических свойствах вируса (способность к гемагглютинации, гемолизу, ферментивной активности), особенностях взаимодействия вируса с клеткой-хозяином (характер цитопатического эффекта, образование внутриклеточных включений).
51. Особенности строения и репликации ретровирусов. Представители.
Репликация. Репликация однонитивой РНК ретровирусов происходит с участием обратной транскриптазы. Вначале на РНК обратная транскриптаза синтизирует комплементарную ей минус цепь ДНК, а затем на ней плюс нить ДНК. Двунитивая ДНК интегрируеца в хромосому клетки и там служит матрицей для синтеза разных классов вирусных РНК. Таким образом, репликация ретровирусов происходит по схеме РнК-ДНК-РНК.
Строение. В состав вирионов ретровирусов входят 5-8 различных полипептидов, в том числе 1-3 гликопротеина оболочки. Внутри копсида имеются несколько десятков малекул обратной транскриптазы, молекулы тРНК и две идентичные геномные одноцепочечные молекулы РНК длиной от 3ёх с половиной до 9тысяч нуклеотидов. Геном ретровируса дикого типа представлен двумя идентичными одноцепочечными молекулами РНК, каждая из которых состоит из шести участков: длинного концевого повтора(5 ‘ LTR), некодирующей последовательности пси, необходимой для упаковки РНК в вирусную частицу; трех генов, кодирующих структурный белок внутреннего капсида, белок обладающий функциями обратной транскриптазы и интегразы, и белок оболочки; 3’LTR-последовательности.
Наиболее известный и активно изучаемы представитель: вирус иммунодефицита человека, возбудитель куриной саркомы (саркомы Рауса) и саркомы Людвига Гросса.