Окраска волютина по методу Лёффлера

1. Высушить и зафиксировать мазок культуры дрожжей.

2. Окрасить мазок метиленовым синим Лёффлера в течение 3 мин.

3. Промыть водой и, не подсушивая, накрыть покровным стеклом.

Зёрна волютина окрашены в красно-фиолетовый цвет, цитоплазма – в голубой.

4. Под покровным стеклом с помощью полоски фильтровальной бумаги перетянуть каплю 1% раствора серной кислоты. Зёрна волютина сохранят окраску, а цитоплазма обесцветится.

5. Под покровным стеклом с помощью полоски фильтровальной бумаги перетянуть каплю 5% раствора соды. Зёрна волютина обесцветятся, а цитоплазма сохранит свой цвет. Микроскопировать ×600, ×1500.

Окраска жира

Жир содержится в клетках практически всех микроорганизмов, но особенно много его накапливается при старении культуры.

1. На предметное стекло нанести небольшую каплю 40% раствора формалина.

2. Зафиксировать препарат: прокалённой петлёй внести в каплю формалина культуру микроба (хорошо подходят старые культуры дрожжей, Bacillus mycoides, Bacillus megaterium) и выдержать 5 мин.

3. В полученную каплю добавить небольшую каплю метиленового синего на 10 мин.

4. Туда же внести каплю судана III (краситель, растворимый в жире, индикатор жироподобных веществ).

5. Образовавшуюся каплю накрыть покровным стеклом, избыток жидкости аккуратно удалить фильтровальной бумагой. Микроскопировать ×1500.

Цитоплазма клеток синего цвета, включения жира – розово-оранжевого.

Окраска по Граму

1. На обезжиренное предметное стекло нанести мазок культуры (площадью 1–2 см²), высушить на воздухе.

2. Фиксировать над пламенем горелки.

3. Сразу же нанести раствор Люголя на 1 мин, до почернения мазка. Стекло держать в наклонном положении над сливной чашкой.

4. Обработать 96% спиртом – 20–30 сек! Промыть водой.

5. Окрасить фуксином Пффейфера 1 мин, промыть водой, высушить. Микроскопировать ×1350 или ×1500.

Примечание. Грамположительные бактерии окрашиваются в тёмно-фиоле-товый цвет, грамотрицательные – в красный. Возраст культуры существенен: достоверную по Граму окраску дают двух-, трёхсуточные клетки; в старых культурах мёртвые клетки всегда грамотрицательные.

Задание 2. Микроскопически исследовать отобранные для изучения колонии, приготовив препараты. Микроскопировать ×600, ×1350 или ×1500. Оформить протокол исследования, описать микробную картину: размеры, форму, характер концов палочковидных бактерий, сочетания клеток и их соединение в конгломератах, отношение к окраске (по Граму), наличие включений, спор и их расположение в клетке, наличие капсул, подвижность, кислотоустойчивость.

Вопросы для самопроверки

1. Классификация бактерий по форме.

2. Кокковые формы в зависимости от расположения кокков, размеры.

3. Палочковидные формы в зависимости от расположения клеток, размеры (отношение диаметра к длине клетки), характер концов клеток, соединение их в образованиях.

4. Морфологическое различие бактерий и бацилл.

5. Морфологическое различие бацилл и клостридий.

6. Морфологические формы клостридий.

7. Извитые формы бактерий, их размеры.

8. Формы бактерий, отличающиеся от основных форм.

9. В каком случае при приготовлении препарата обезжиривается предметное стекло?

10. Почему микробная масса должна быть размазана очень тонким слоем по стеклу?

11. Что такое фиксация мазка и каковы её цели?

12. Способы фиксации мазка.

13. Что такое окрашивание мазка?

14. Позитивные и негативные красители.

15. Что такое простой метод окрашивания и техника его приготовления?

16. Какие красители используются в простых методах окрашивания?

17. Что позволяют увидеть простые методы окрашивания?

18. Существуют ли временные ограничения при окрашивании мазков?

19. Что такое сложные методы окрашивания?

20. Какие сложные методы окрашивания вы знаете?

21. Какие соединения используются в качестве закрепителей и протравителей?

22. Что позволяют изучить сложные методы окрашивания микробиологических препаратов?

23. Основные красители (примеры). В каком случае они используются?

24. Кислые красители (примеры). В каком случае они используются?

25. На чём основаны сложные методы окраски и для чего они применяются?

26. Окраска по Граму: суть метода и техника.