Лабораторная работа 2 Техника приготовления микробиологического препарата. Знакомство с формами бактерий

Цель работы: отработать технику приготовления фиксированного микробиологического препарата; изучить основные формы бактерий на примере микрофлоры ротовой полости, микроорганизмов, выделенных из воздуха и других сред.

Знакомство с формами бактерий обычно происходит на окрашенных микробиологических препаратах. Для этого можно использовать колонии микроорганизмов, которые выросли в посевах в чашках Петри при анализе микрофлоры воздуха, микрофлору ротовой полости и другие культуры бактерий, предварительно выращенные.

Задание 1. Отработать последовательность приготовления фиксированного окрашенного препарата.

Техника приготовления фиксированного окрашенного препарата

1. Приготовление мазка. Работы проводить при зажжённой спиртовке (горелке). На обезжиренное предметное стекло нанести каплю воды, затем, приоткрыв левой рукой крышку чашки Петри, предварительно прокалённой петлёй захватить из одной колонии небольшое количество микробной массы, которую внести в каплю воды, тщательно перемешать и сделать тонкий мазок по поверхности стекла.

2. Высушивание. Полученный мазок высушить на воздухе.

3. Фиксация. Захватив пальцами боковые рёбра стекла, несколько раз провести его тыльной стороной над пламенем горелки. Фиксация проводится для того, чтобы:

а) обеспечить лучшее прилипание мазка к стеклу;

б) убить микроорганизмы, обеспечив безопасность;

в) сделать мазок более восприимчивым к окраске, так как убитые микроорганизмы лучше прокрашиваются.

4. Окраска. Фиксированный препарат поместить на специальную подставку и покрыть раствором соответствующего красителя. Окрашивание вести фуксином (3 мин) или метиленовой синью (5 мин). Затем краситель слить, мазок промыть водой и препарат подсушить полосками фильтровальной бумаги.

5. Подготовка к микроскопированию. На абсолютно сухой препарат нанести небольшую каплю иммерсионного масла и рассматривать микробную картину, пользуясь иммерсионным объективом.

Задание 2. Приготовленный препарат микроскопировать при увеличении ×1350 или ×1500. Различные формы бактерий зарисовать, оформив протокол исследования. Для успешного выполнения задания следует пользоваться определителями.

Вопросы для самопроверки

1. Каково устройство оптической системы биологического микроскопа?

2. Что такое иммерсия?

3. Что такое иммерсионный объектив и в каких случаях он используется?

4. Что и с какой целью используется в качестве иммерсионного масла?

5. Расстояние от фронтальной линзы микроскопа до микроскопического препарата при использовании сухого объектива ×40.

6. Расстояние фронтальной линзы микроскопа до микроскопического препарата при использовании иммерсионного объектива.

7. Положение конденсора при микроскопировании фиксированных препаратов.

8. Положение конденсора при микроскопировании живых препаратов.

9. Положение диафрагмы при микроскопировании живых препаратов.

10. Положение диафрагмы при микроскопировании фиксированных препаратов.

11. Когда используют винт тонкой настройки микроскопа и как его вращают?

12. Как осуществляют фокусировку препаратов?

13. Состояние фронтальной линзы иммерсионного объектива после работы.

14. Положение микроскопа после работы.

15. Что такое фазово-контрастная микроскопия?

16. Что такое люминесцентная микроскопия?

17. Что такое электронная микроскопия?