Определение общего количества микроорганизмов в почве

Цель работы: осуществить количественный учёт микроорганизмов в исследуемой почве, по микробному числу сделать вывод о степени насыщения исследуемой почвы органикой и обеспеченности растений элементами питания.

Постановка исследования

Задание 1. Использовать метод предельных разведений (рис. 13): осуществить смыв микроорганизмов с частичек почвы, приготовив разведения, и произвести посев микроорганизмов глубинным методом из предпоследнего и последнего разведений на питательную среду в двух повторностях: 4–1, 4–2; 5–1, 5–2.

Использовать среды:

ПАС-1 – для выделения бактерий кишечной и кокковой групп;

ПАС-2 – для выделения энтеробактерий, кокков, коринебактерий;

МПА – для определения общего количества микробов.

Почву освободить от крупных частиц, корней, щебня и т.п. Измельчить, перемешать, взять навеску в 1 г и поместить в колбу. Затем прилить 99 мл стерильной воды. Взбалтывать 3–5 мин, отстаивать 2 мин. После каждого переноса 1 мл разведения размешивать 1 мин, отстаивать 30 сек (для плодородной почвы степень разведения – 10^–8–10^–10, для бедной – 10^–6–10^–7). В пробирки предварительно внести по 9 мл стерильной дистиллированной воды.

1 мл	1 мл	1 мл		1 мл			1 мл		1 мл
99 мл воды 1 г почвы 1 1 г почвы 99 мл воды	9 2	9 3		9 4			9 5		9 6
1:100	1:1000		1:10 000		1:100 000	1:1 000 000		1:10 000 000
						1 мл 4–1		1 мл 1 мл 5–1
						1 мл 4–2		5–2

Рис. 13. Схема предельных разведений

Из предпоследнего и последнего разведений пипетками взять по 1 мл разведения, предварительно взболтав и отстояв, внести в чашку Петри на дно (глубинный посев) по 2 или более повторности и залить по 15 мл среды (МПА, ПАС-1, ПАС-2) температурой 45–50 ^оС. Быстро закрыть чашки крышками, после охлаждения и отвердевания среды чашки с посевами перевернуть и поставить в термостат.

Инкубировать до 2 суток (24–48 ч) при температуре 30–35 ^оС, затем 1–2 суток при комнатной температуре.

Примечание. Подписать пробирки, градуированные пипетки, чашки Петри, отметить повторности (4–1, 4–2; 5–1, 5–2).

Анализ исследования

Задание 2. Произвести количественный учёт микроорганизмов по формуле

Х_мo = n_к × степень разведения,

где Х_мо – количество микроорганизмов (бактерий, грибов) в 1 г почвы;

n_к – количество колоний, сформировавшихся на поверхности питательной среды.

Из суммы колоний, выросших на средах в двух чашках (2 повторности), вывести среднеарифметическое число и подсчитать количество микроорганизмов в 1 г исследуемой почвы по формуле

Исходя из микробного числа, сделать вывод о степени насыщения исследуемой почвы органикой и обеспеченности растений элементами питания.