Приёмы посева (рассева) микроорганизмов по поверхности плотных питательных сред

При рассеве микробов целостность поверхности среды не нарушать!

1. Посев штрихом (рис. 7). Микробную массу берут петлёй, делают по поверхности застывшей питательной среды параллельно шесть штрихов. Затем петлю прокаливают, снова берут микробы и наносят очередные шесть штрихов и т.д. (количество штрихов может быть разное).

Рис. 7. Схема последовательности нанесения штрихов

микробиологической петлёй (1–24)

2. Рассев шпателем (рис. 8). Микробную массу или споры актиномицета, гриба берут петлёй, наносят на агаровую пластинку и шпателем распределяют по поверхности питательной среды в одной чашке (получение сплошного газона) или этот же шпатель переносят в каждую последующую чашку и в последней получают одиночные колонии.

Рис. 8. Схема последовательности рассева микробных клеток шпателем

Рассев микробов (рис. 9) осуществляют петлёй, делая одинаковую штриховую линию в каждой чашке и не прокаливая петлю, добиваясь уменьшения количества микробных клеток в последней чашке.

Рис. 9. Схема последовательности рассева микробных клеток

микробиологической петлёй

3. Рассев петлёй по секторам (1–3) в одной чашке (рис. 10). Действуют так же, как и в предыдущем приёме, но штрихи делают в каждом секторе.

Рис. 10. Схема последовательности рассева микробных клеток петлёй по секторам

Методы выделения чистой культуры

Чистой культурой называют микроорганизмы одного вида, выросшие на питательной среде.

Для выделения чистой культуры существует несколько методов.

Метод Дригальского. Берут несколько чашек Петри со стерильным МПА (ПАС), устанавливают их в ряд. В первую чашку на поверхность среды наносят каплю микробной массы. Стерильным шпателем растирают каплю по поверхности агара, закрывают чашку крышкой, после чего этот шпатель переносят во вторую чашку (затем – в третью, четвертую и т.д.) и растирают оставшиеся на нём микробные клетки по поверхности питательной среды. Чашки помещают в термостат, перевернув их вверх дном. Самый значительный рост будет в первой чашке, в последней чашке обычно получают изолированные друг от друга колонии.

Колонии изучают по их внешнему виду, из них готовят микробиологические препараты и микроскопируют. Отобрав колонию с характерными для данного вида признаками, из нее бактериологической петлёй производят посев в пробирки с МПБ и МПА для получения чистой культуры микроба одного вида.

Метод Пастера основан на последовательном разведении в 10 пробирках с жидкой средой капли смеси бактерий с расчетом получить в последней пробирке чистую культуру.

При использовании плотных питательных сред разведения производят в плотной расплавленной среде и содержимое каждой пробирки с разным количеством исследуемого материала (микробов) выливают в отдельную чашку Петри. После выдерживания в термостате в чашках с наибольшим разведением обнаруживают отдельные колонии. Пересеяв отдельную колонию в среды в пробирках, культивируют в термостате и получают чистую культуру микроба.

Анализ исследования

Задание 3. После инкубирования (обычно 2–5 суток) посевы изучить: описать характер роста культуры на среде и культуральные признаки по схеме (см. с. 27), приготовить живые и фиксированные препараты. Микроскопировать при увеличении ×600, ×1500. Изучить форму, размеры клеток, способность к движению, наличие спор и их расположение, наличие капсул, включений в клетках (гликоген, гранулёза, волютин, жир), отношение к окраске по Граму. Оформить протокол и описать микробную картину. Данные занести в нижеприведённую таблицу.