Проба Шлезингера.
Принцип метода.
Появление флюоресценции уробилина за счёт образовавшихся цинкуробилиновых комплексов.
Необходимые реактивы:
1. Насыщенный спиртовой раствор ацетата цинка (10 г на 100 мл 96° спирта).
2. Раствор Люголя.
Ход исследования.
К 4—5 мл мочи приливают равное количество реактива (реактив предварительно взбалтывают) и 1 каплю раствора Люголя. Оставляют на 10 мин, затем фильтруют. Пробирку просматривают на тёмном фоне в отражённом свете. При наличии уробилина образуется зелёная флюоресценция. Некоторые медикаменты, например атебрин, дают положительную пробу Шлезингера. Для разграничения настоящей положительной пробы и медикаментозной прибавляют разведённую соляную или серную кислоту. Флюоресценция, вызванная уробилином, исчезает, медикаментозная остается.
Унифицированная проба Флоранса
Принцип метода:
С НСl уробилин образует соединение, окрашенное в красный цвет.
Необходимые реактивы:
1. Серная кислота концентрированная.
2. Диэтиловый эфир.
3. НСl концентрированная.
Ход исследования.
Мочу в количестве 8—10 мл подкисляют в пробирке 8—10 каплями концентрированной серной кислоты, перемешивают, затем приливают 2—3 мл эфира и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз осторожно пропускают эфир через слой мочи для экстрагирования уробилина. Затем эфирную вытяжку мочи наслаивают, лучше пастеровской пипеткой, на 2—3 мл концентрированной НСl, налитой в другую пробирку. При наличии уробилина на границе жидкостей образуется розовое кольцо. Интенсивность окраски пропорциональна количеству уробилина.
Проба настолько чувствительна, что даже в норме на границе между двумя жидкостями видно лёгкое розовое окрашивание. Этой пробой можно установить полное отсутствие уробилиноидов в моче.
Унифицированная проба Богомолова
Принцип метода
Уробилин с сульфатом меди образует соединение красно-розового цвета.
Необходимые реактивы:
1. Меди сульфат, насыщенный раствор: 23 г CuSO4∙ 5H2O растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
2. Хлороформ.
Ход исследования.
К 10—15 мл мочи приливают 2—3 мл насыщенного раствора сульфата меди. Если образуется помутнение, то прибавляют несколько капель концентрированной НСl до прояснения раствора. Через 5 мин приливают 2—3 мл хлороформа и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз встряхивают.
Если хлороформ окрашивается в розовый цвет, то концентрация уробилина в моче выше нормальной.
Унифицированная бензальдегидная проба Нейбауэра
Проба основана на том, что уробилиногеновые тела с пара-диметиламинобензальдегидом (реактив Эрлиха) дают соединение красной окраски.
Необходимый реактив.
Реактив Эрлиха — 2 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 100 мл 20%-ного раствора соляной кислоты.
Ход исследования
К 3—4 мл свежевыпущенной мочи, охлажденной до комнатной температуры, прибавляют 3—4 капли реактива Эрлиха (1 каплю на 1 мл мочи). Окрашивание жидкости в красный цвет в течение первых 30 сек. говорит об увеличенном содержании уробилиногена в моче; если окрашивание развивается по прошествии 30 сек., то концентрация уробилина в моче нормальная, а если через 30 сек. окраска не развивается, то это может быть вариантом нормы или можно говорить о полном отсутствии уробилиногена в моче.
Билирубин мешает определению уробилиноидов, поэтому, если он обнаружен в моче, его следует предварительно удалить, осаждая хлоридом бария с последующим фильтрованием. Для этого к 10—12 мл мочи приливают 5—6 мл 10%-ного раствора ВаСl2 и фильтруют. Затем фильтрат проверяют на полноту осаждения билирубина и процедуру повторяют, если первое осаждение было неполным.