Определение желчных пигментов.

Моча здоровых людей содержит минимальные количества билирубина, которые не могут быть обнаружены качественными пробами, применяемыми в практической медицине. С мочой выделяется только билирубина глюкуронид (прямой билирубин), концентрация которого в норме в крови незначительна.

Билирубинурию наблюдают главным образом при поражениях паренхимы печени (паренхиматозные желтухи) и нарушении оттока желчи (обтурационные желтухи). Для гемолитической желтухи билирубинурия нехарактерна, так как гемобилирубин (непрямой билирубин) не проходит через почечный фильтр.

Большинство качественных проб для обнаружения билирубина в моче основано на его превращении под действием окислителя в зелёный биливердин или пурпурно-красные билипурпурины, которые, примешиваясь к биливердину, дают синее окрашивание.

Унифицированная проба Фуше. Необходимые реактивы.

1. 15%-ный раствор хлорида бария.

2. Реактив Фуше: 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10%-ного раствора хлорного железа (FeCl₃).

Ход исследования

К 10 мл мочи прибавляют 5 мл 15%-ного раствора хлорида бария. Смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки и расправленный на дне чашки Петри фильтр наносят 2 капли реактива Фуше. Появление на фильтре сине-зелёных пятен говорит о присутствии билирубина. Если реакция мочи щелочная, то необходимо подкислить ее несколькими каплями уксусной кислоты.

Унифицированная проба Розина.

Необходимый реактив:

1%-ный спиртовой раствор йода.

Ход исследования.

В пробирку наливают 4—5 мл мочи и осторожно, по стенкам пробирки, наслаивают раствор йода. Появление на границе между жидкостями зелёного кольца говорит о наличии билирубина.

Проба Готфрида.

Принцип метода — билирубина глюкуронид (холебилирубин) при соединении с диазотированной сульфаниловой кислотой (диазобензосульфоновая кислота) даёт розовую окраску за счет образования билирубина.

Необходимые реактивы.

1. 10%-ный раствор хлорида бария.

2. Диазореактив: диазораствор I — 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в небольшом количестве воды, прибавляют 15 мл концентрированной HCl и доливают до 1000 мл дистиллированной водой.

3. Диазораствор II — 0,5%-ный раствор нитрата натрия. Непосредственно перед определением смешивают 10 мл диазораствора I и 0,25 мл диазораствора II.

4. Спирт этиловый 96%-ный.

5. 6%-ный раствор двузамещенного фосфата натрия.

Ход исследования

К 10 мл мочи, подкислённой несколькими каплями уксусной кислоты, прибавляют 5 мл 10%-ного раствора хлорида бария, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр. Фильтр раскладывают на дне чашки Петри и на осадок, содержащий билирубин, капают 1—2 капли свежеприготовленной диазосмеси, 4 капли спирта и 1 каплю двузамещенного фосфата натрия. При положительной пробе получается красно-фиолетовая окраска.

Этот принцип лег в основу экспресс-тестов для определения билирубина, выпускаемых зарубежными фирмами “Ames” (Англия), “Boehringer” (Германия) и др.

Определение содержания уробилиноидов.

В моче здорового человека содержатся следы уробилиногена, а за сутки выделяется не больше 6 мг, у детей — не более 2 мг.

В свежевыпущенной моче содержится уробилиноген, который при стоянии мочи окисляется в уробилины. Все эти вещества являются производными билирубина и называются уробилиноидами. Уробилиноиды образуются под действием ферментов бактерий и клеток слизистой оболочки кишечника из билирубина, выделившегося с желчью.

Определение уробилина имеет большое клиническое значение. Присутствие его в количествах, превышающих норму, может быть при гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, некоторые инфекции, например, малярия и др.), при заболевании печени (гепатиты, цирроз печени, отравления и пр.), при кишечных заболеваниях и лихорадочных состояниях, что связано с токсическим поражением печени. Большое диагностическое значение имеет исследование уробилина в моче при желтухах. Полное отсутствие уробилина указывает на обтурационную желтуху. Повышение содержания уробилина обнаруживается при паренхиматозной и гемолитической формах желтух.