“УТВЕРЖДАЮ’’
Зав. кафедрой биологии
Д.м.н. М.В. Черников
“1” сентября 2011 г.
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
к практическому занятию по разделу «Биология клетки»
для студентов 1 курса специальности «Лечебное дело»
ТЕМА. Микроскоп и правила работы с ним
ЦЕЛЬ. На основании знания устройства светового микроскопа, освоить технику микроскопирования и приготовления временных микропрепаратов.
ПЕРЧЕНЬ ЗНАНИЙ И ПРАКТИЧЕСКИХ НАВЫКОВ
Знать основные части микроскопа, их назначение и устройство.
Знать правила подготовки микроскопа к работе.
Уметь работать с микроскопом при малом и большом увеличении.
Уметь готовить временные микропрепараты.
Уметь правильно вести протокол практической работы.
ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ ТЕМЫ
Основные виды микроскопии.
Основные части светового микроскопа их назначение и устройство.
Элементы механической части микроскопа.
Осветительная часть микроскопа. Каким образом можно увеличить интенсивность освещенности объекта?
Оптическая часть микроскопа. Как определить увеличение объекта?
Правила подготовки микроскопа к работе.
Правила работы с микроскопом.
Техника приготовления временного микропрепарата.
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ ТЕМЫ
Микроскоп используется для изучения мелких объектов. В практической работе обычно пользуются микроскопом МБР-1 микроскоп биологический рабочий), или МБИ-1 (микроскоп биологический исследовательской) «Биолам» и МБС-1 (стереоскопический микроскоп).
ВИДЫ МИКРОСКОПИИ: световая (лупа, люминесцентный, обычный световой микроскоп – МБИ – 1, МБР-1, «Биолам» и др.) и электронная (просвечивающий и сканирующий микроскоп).
СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ – основной метод изучения биологических объектов, поэтому освоение техникой микроскопирования, приготовления временных микропрепаратов необходимо для практической работы врача. Разрешающая способность светового микроскопа ограничена длиной световых волн. Современные световые микроскопы дают увеличение до 1500. Очень важно, что в световом микроскопе можно изучать не только фиксированные, но и живые объекты. Поскольку структуры большинства живых клеток недостаточно контрастны (они прозрачны), разработаны специальные методы световой микроскопии, позволяющие повысить контрастность изображения объекта. К таким методам относятся фазово-контрастная микроскопия, микроскопия в темном поле и др.
ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ – использует не свет, а поток электронов, проходящий через электромагнитные поля. Длина волны электронов зависит от напряжения, подаваемого для генерации электронного пучка, практически можно получить разрешение приблизительно в 0,5 нм, т.е. примерно в 500 раз больше, чем в световом микроскопе. Электронный микроскоп позволил не только изучить строение ранее известных клеточных структур, но и выявить новые. Так, было обнаружено, что основу строения многих клеточных органоидов составляет элементарная клеточная мембрана.
Основные части микроскопа: механическая, оптическая и осветительная.
Механическая часть. К механической части относятся штатив, предметный столик, тубус, револьвер, макро- и микрометрические винты. Штатив состоит из основания, придающего микроскопу устойчивость. От середины основания вверх отходит тубусодержатель, к нему прикреплен тубус, расположенный наклонно. На штативе укреплен предметный столик. На него помещают микропрепарат. На предметном столике имеются два зажима (клеммы) для фиксации препарата. Через отверстие в предметном столике обеспечивается освещение объекта.
На боковых поверхностях штатива имеются два винта, с помощью которых можно передвинуть тубус. Макрометрический винт служит для грубой настройки на фокус (на четкое изображение объекта при малом увеличении микроскопа). Микрометрический винт используется для тонкой настройки на фокус.
Оптическая часть. Оптическая часть микроскопа представлена окулярами и объективами. Окуляр (лат. осиllus – глаз) находится в верхней части тубуса и обращен к глазу. Окуляр представляет собой систему линз. Окуляры могут давать различное увеличение: в 7 (×7), 10 (×10), 15 (×15) раз. На противоположной стороне тубуса находится вращающийся диск – револьверная пластинка. В ее гнездах закреплены объективы. Каждый объектив представлен несколькими линзами, так же как окуляр, позволяет получить определенное увеличение: ×8, ×40, ×90.
Общее увеличение микроскопа равно увеличению окуляра, умноженному на увеличение объектива.
Осветительная часть микроскопа состоит из зеркала, конденсора и диафрагмы. Зеркало расположено в нижней части штатива и служит для направления светового пучка от источника света на объект. Зеркало имеет плоскую и вогнутую поверхности. Плоскую поверхность зеркала используют при естественном освещении, вогнутую – при искусственном свете. Конденсор находится между зеркалом и предметным столиком. ОН состоит из 2-3 линз, заключенных в общую оправу. Меняя положение конденсора (выше, ниже), можно изменять интенсивность освещенности объекта. Для перемещения конденсора используют специальный винт. При опускании конденсора освещенность уменьшается, при поднятии (к предметному столику) – увеличивается.
Ирисовая диафрагма, вмонтированная в нижнюю часть конденсора, регулирует освещение. Диафрагма состоит из пластинок, расположенных по кругу и частично перекрывающих друг друга таким образом, что в центре остается отверстие для прохождения светового пучка. С помощью ручки можно менять размер отверстия диафрагмы. Максимально суженная диафрагма способствует наибольшей четкости изображения, что важно при рассмотрении прозрачных объектов.
Правила работы с микроскопом мбр-1
При переносе микроскоп следует брать правой рукой за ручку штатива и поддерживать его снизу левой рукой.
Установите микроскоп так, чтобы его зеркало находилось против источника света.
Поставьте в рабочее положение объектив малого увеличения. Для этого поворачивайте револьвер до тех пор, пока нужный объектив не займет срединное положение по отношению к тубусу и предметному столику (встанет над отверстием столика). Когда объектив занимает срединное (центрированное) положение, в револьвере срабатывает устройство — защелка; при этом слышится легкий щелчок, и револьвер фиксируется.
Запомните, что изучение любого объекта начинается с малого увеличения.
С помощью макрометрического винта поднимите объектив над столиком на высоту примерно 0,5 см. Откройте диафрагму и немного приподнимите конденсор.
Глядя в окуляр (левым глазом!), вращайте зеркало в разных направлениях до тех пор, пока поле зрения не будет освещено ярко и равномерно.
Положите на предметный столик приготовленный препарат покровным стеклом вверх, чтобы объект находился в центре отверстия предметного столика.
Под контролем зрения медленно опустите тубус с помощью макрометрического винта, чтобы объектив находился на расстоянии около 2 мм от препарата.
Смотрите в окуляр и одновременно медленно поднимайте тубус с помощью макрометрического винта до тех пор, пока в поле зрения не появится изображение объекта (фокусное расстояние для малого увеличения равно приблизительно 0,5 см).
Чтобы перейти к рассмотрению объекта при большом увеличении микроскопа, необходимо центрировать препарат, т.е. поместить объект или ту часть его, которую вы рассматриваете, в самый центр поля зрения, глядя в окуляр, пока объект не займет нужного положения. Если объект не будет центрирован, то при большом увеличении он останется вне поля зрения.
Вращая револьвер, поставьте над препаратом объектив большого увеличения. При этом слышится щелчок, и револьвер фиксируется.
Для тонкой фокусировки используйте микрометрический винт.
При зарисовке препарата смотрите в окуляр левым глазом, а в альбом — правым.
При изучении в световом микроскопе мелких объектов используют иммерсионный (лат. immersia — погружать или окунать) объектив. При работе с этим объективом на покровное стекло необходимо поместить каплю вещества, имеющего показатель преломления, одинаковый со стеклом. Обычно для этого используют кедровое масло. Между линзой и покровным стеклом не остается воздушной прослойки, и луч света проходит через однородную в отношении показателя преломления среду без отклонения. При работе с иммерсионным объективом пункт 8 и 9 остаются в силе.
Опустите тубус (глядя на него сбоку) так, чтобы нижняя линза объектива погрузилась в каплю иммерсионного масла.
Затем, глядя в окуляр, с помощью только микровинта следует осторожно (!) (фокусное расстояние для объектива х90 еще меньше, чем для объектива х40) немного опустить, а затем поднять объектив, чтобы получить четкое изображение.
Помните, что работа с иммерсионным объективом требует более интенсивного освещения поля зрения.