Количественное определение

Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: cумма флавоноидов в пересчете на рутин – не менее 1,5 %.

Приготовление растворов.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,05 г (точная навеска) СО рутина, предварительно высушенного при температуре 130 – 135 °С в течение 3 ч, растворяют в 85 мл спирта 96 % в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО рутина). Срок годности не более

30 сут при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

1,0 мл раствора А СО рутина, 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2 %, доведенного спиртом 96 % до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл, перемешивают. (раствор Б СО рутина).

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта 50 %. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. В колбу для экстрагирования прибавляют 30 мл спирта 50 %. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, фильтруют извлечение в ту же мерную колбу. После охлаждения объем извлечения доводят спиртом 50 % до метки и перемешивают (раствор А испытуемого раствора). В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл раствора А испытуемого раствора, 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2 %, доводят объем раствора спиртом 96 % до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).

Оптическую плотность раствора Б испытуемого раствора измеряют через 40 мин на спектрофотометре при длине волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А испытуемого раствора и 0,1 мл уксусной кислоты разведенной 30 %, доведенный спиртом 50 % до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО рутина в таких же условиях. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А СО рутина, 0,1 мл уксусной кислоты разведенной 30 % и доведенный спиртом 96 % до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где A – оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

A_о – оптическая плотность раствора Б СО рутина;

а – навеска сырья, г;

а_о – навеска СО рутина, г;

P – содержание основного вещества в СО рутина, %;

W – влажность сырья, %.

Допускается содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом по формуле:

где

A – оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

– удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия

хлорида при длине волны 415 нм, равный 248;

а – навеска сырья, г;

W – влажность сырья, %.

Качественные реакции.

К 1 мл извлечения, полученного согласно методике, описанной в разделе "Количественное определение", прибавляют 2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте и 7 мл 95% спирта; раствор окрашивается в зеленовато - желтый цвет (флавоноиды).

13. Предложите метод количественного определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин в траве горца птичьего, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания. Напишите химизм реакции, протекающей при количественном определении данной группы БАВ на примере авикулярина. Ершов Михаил

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: суммы флавоноидов в пересчёте на авикулярин - не менее 0,5 %.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл спирта 70 %, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры под струёй холодной воды и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше способом. Извлечения фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, фильтр промывают спиртом 70 %, доводят объем фильтрата тем же растворителем до метки и перемешивают (раствор А).

4,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30 %, прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 2 % в спирте 96 % и доводят объем раствора спиртом 96 % до метки и перемешивают (раствор Б).

Через 20 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 4,0 мл раствора А, 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30 %, доведенный спиртом 96 % до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где A – оптическая плотность раствора Б;

– удельный показатель поглощения комплекса авикулярина с алюминия хлоридом при длине волны 410 нм, равный 330;

a – навеска сырья, г;

W – влажность сырья, %.

14. Предложите метод количественного определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид в плодах боярышника, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания. Напишите химизм реакции, протекающей при количественном определении данной группы БАВ на примере гиперозида. Иванова Елена

Количественное определение. Содержание суммы флавоноидов в пе­ресчете на гиперозид должно быть не менее 0,003 %.

Приготовление растворов.

Буферный раствор рН 4,0. 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида по­мещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 57 мл 1 М рас­твора уксусной кислоты, доводят объем раствора водой до метки и переме­шивают.

5,0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, при­бавляют 6 мл алюминия хлорида раствора 2 %, помещают на 3 мин в кипя­щую водяную баню, быстро охлаждают, добавляют 2 мл буферного раствора рН 4,0, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (испытуемый раствор).

Оптическою плотность полученного испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 5 мл препарата, 2 мл буферного раствора рН 4,0, помещенный в мерную кол­бу вместимостью 25 мл, и доведенного спиртом 70% до метки.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид в настойке в процентах (X) вычисляют по формуле:

где:

А - оптическая плотность испытуемого раствора;

- удельный показатель поглощения комплекса СО гиперозида с алюминия хлоридом при длине волны 410 нм, равный 380;

а - объем настойки, взятый для определения, мл;

25 - разведение, мл.

15. Предложите метод количественного определения содержания гиперозида в плодах боярышника, учитывая свойства данного вещества и требования Государственной Фармакопеи XIV издания. Напишите химизм реакции, протекающей при количественном определении данной группы БАВ на примере гиперозида. Деменюк Пашар

Раствор стандартного образца (СО) гиперозида. Около 0,05 г (точная навеска) СО гиперозида, высушенного при температуре 100-105 °С до постоянной массы, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 40,0 мл спирта 96 % и нагревают на водяной бане в колбе с обратным холодильником до полного растворения кристаллов. После охлаждения раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 96 % до метки и перемешивают. Срок годности 30 сут.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, приливают 100,0 мл спирта 96 %, взвешивают с погрешностью ± 0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивают и доводят до первоначальной массы спиртом 96 %. Содержание колбы фильтруют через воронку диаметром 7 см с вложенным ватным тампоном толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 30,0 мл фильтрата. 50,0 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл и упаривают на ротационном испарителе под вакуумом до объема 2-3 мл. Упаренное извлечение количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 96 % до метки, перемешивают и дают осесть образовавшемуся аморфному осадку (испытуемый раствор).

На стартовую линию аналитической хроматографической пластинки размером 15×15 см наносят 80,0 мкл (0,08 мл) испытуемого раствора полосой длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от края. Рядом наносят 80,0 мкл (0,08 мл) 0,1% раствора СО гиперозида. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин и хроматографируют в системе хлороформ-метанол (8:2) без предварительного насыщения. Когда фронт растворителей дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, высушивают в вытяжном шкафу в течение 2 мин и повторно хроматографируют в той же системе, сушат в вытяжном шкафу до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. Отмечают зоны адсорбции гиперозида на хроматограммах испытуемого раствора и раствора СО гиперозида. Вырезают участки пластинки с зонами адсорбции, а также чистый участок равной площади этой же пластинки для контрольного опыта, разрезают каждый на кусочки размером 0,3-0,5 см, помещают в колбы со шлифами вместимостью 50 мл, прибавляют по 10,0 мл смеси диоксан - вода (1:1), закрывают пробками и встряхивают в течение 1 ч. Содержимое колб переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 1000 об/мин в течение 5 мин.

Оптическую плотность элюатов измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 365 нм. В качестве раствора сравнения используют элюат контрольного опыта. Содержание гиперозида в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

, где

А – оптическая плотность испытуемого элюата;

А_о – оптическая плотность элюата СО гиперозида;

а_о – навеска СО гиперозида, г;

а – навеска сырья, г;

W – влажность сырья, %.

Галактозы остаток (Gal)

16. Предложите метод количественного определения содержания суммы флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в цветках пижмы обыкновенной, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Сырье: цельное сырье, измельченное сырье, порошок. Сумма флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в пересчете на лютеолин в - не менее 2,5%

Приготовление растворов

Приготовление буферного раствора рН 9,0: к 900 мл раствора натрия тетрабората (0,05 моль/л) прибавляют 100 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л) и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Приготовление раствора СО лютеолина: около 0,050 г (точная навеска) СО лютеолина, предварительно высушенного при температуре 105 — 110 °С в течение 2 ч, растворяют в 85 мл буферного раствора рН 9,0 в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же буферным раствором до метки и перемешивают (раствор А СО лютеолина). Срок годности раствора в течение 7 суток.

1,0 мл раствора А СО лютеолина, помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки буферным раствором рН 9,0 и перемешивают (раствор Б СО лютеолина), готовят перед использованием.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 300 мл и прибавляют 200 мл спирта 96 %. Колбу закрывают и взвешивают с погрешностью ± 0,01 г, затем присоединяют к обратному холодильнику с водяным охлаждением и нагревают на кипящей водяной бане в течение 3,5 ч. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят массу колбы до первоначальной спиртом 96%. Извлечение отфильтровывают через бумажный фильтр, отбрасывая первые 20 мл фильтрата. 50,0 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 мл и отгоняют спирт под вакуумом досуха. Сухой остаток в колбе промывают 3 раза по 20 мл дихлорэтаном, насыщенным водой. Затем содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл с помощью буферного раствора рН 9,0 4 раза порциями по 20 мл. Объем раствора в мерной колбе доводят до метки тем же буферным раствором и перемешивают. Содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл и очищают дихлорэтаном 4 раза порциями по 20 мл. В мерную колбу вместимостью 25 мл переносят 1,0 мл очищенного раствора, доводят объем раствора буферным раствором рН 9,0 до метки и перемешивают (раствор А испытуемого раствора).

Оптическую плотность раствора А испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 310 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют буферный раствор рН 9,0. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО лютеолина.

Содержание суммы флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в пересчете на лютеолин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где

А – оптическая плотность раствора А испытуемого раствора;

А₀ – оптическая плотность раствора Б СО лютеолина;

а – масса сырья, г;

а₀ – масса СО лютеолина, г;

W – влажность сырья, %.

Р – содержание основного вещества в СО лютеолина, %

17. Предложите метод количественного определения содержания арбутина в листьях толокнянки обыкновенной, учитывая свойства данного вещества и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.