Фиксирующие средства и их применение

Применяемые фиксаторы разделяют на две основные группы:

1) фиксирующие вещества (простые фик­саторы);

2) фиксирующие смеси (сложные фикса­торы). Существует большое количество тех и других. В на­стоящем руководстве приводятся наиболее распространен­ные фиксаторы.

Простые фиксаторы

Формалин (формол) является самым дешевым и распространенным фиксатором. В чистом виде представляет, светлую, сильно пахнущую жидкость, состоящую из 40% водного раствора формальдегида. Применяется преимущественно в виде 10-20% водного раствора, для чего 1 часть неразведенного формалина разводят 9 или 4 частями воды. Приготавливают раствор обязательно на водопроводной воде, так как дистиллированная вызывает набухание тканей. Широкое применение формалин получил благодаря ряду свойств:

а) высокой степени диффузии;

б) способности хорошо сохранять форму, окраску и структуру исследуемого объекта;

в) оказывать длительное фиксирующее действие (до нескольких лет), существенно не ухудшая при этом качество материала;

г) хорошо сохранять жиры и липоиды.

Высокая диффузионная способность и незначительное осаждающее действие позволяют формалину довольно быстро и глубоко проникать в ткани, что позволяет фиксировать кусочки органа от 1 см и более, а при необходимости и довольно крупные органы целиком.

Срок фиксации тканей в формалине 24-48 часов. Обычный формалин, как правило, содержит примесь метилового спирта и муравьиной кислоты, количество которой увеличивается под влиянием света.

При охлаждении формалина в растворе появляется муть, оседающая в виде белого осадка (параформальдегид). Такой же осадок наблюдается на стенках сосуда и при испарении формалина. Поэтому формалин следует хранить в темной плотно закрывающейся стеклянной посу­де, при температуре не ниже 9°С.

Нейтрализация формалина.Примесь в формалине муравьиной кислоты придает раствору слабокислый характер, что нежелательно при применении ряда методов исследования (некоторые гистохимические реакции, сереб­рение раствором азотнокислого серебра). Способ нейтрали­зации формалина довольно прост: в сосуд засыпают угле­кислый кальций (или углекислую магнезию) в таком коли­честве, чтобы на дне образовался слой толщиной 1,5-2 см. Затем наливают формалин, несколько раз энергично встря­хивают и оставляют стоять 24-48 часов. В течение этого времени происходит нейтрализация раствора.

Побочные действия формалина. Длительное хранение препаратов в концентрированном растворе форма­лина придает тканям чрезмерную плотность, затрудняющую дальнейшую обработку и ухудшающую качество препарата. Устранение этого недостатка' возможно путем помещения материала на 2 недели в 1 % раствор азотнокислого серебра или 10% раствор лимонной кислоты. Длительное хранение в 10% растворе формалина приводит также к набуханию объекта, что необходимо помнить при его измерении после фиксации.

При фиксации формалином в препаратах нередко появ­ляется темно-коричневый кристаллический осадок – резуль­тат взаимодействия формалина с находящимся в тканях ге­моглобином. Его удаляют путем помещения неокрашенных срезов в 1-5% раствор нашатырного спирта или 70° этило­вый алкоголь на различные сроки (от 5 минут до 4 часов). Затем препарат тщательно промывают и ведут дальнейшую обработку.

Следует постоянно помнить, что длительное действие паров формалина сильно раздражает слизистые оболочки. Смачивание кожи формалином оказывает дубящий эффект, а при повторных частых кон­тактах вызывает сухую экзему. Поэтому перед препариро­ванием формалиновые препараты помещают в слабо ам­миачную воду (для устранения запаха) и работают в ре­зиновых перчатках.

Этиловый спирт. Фиксирующее действие осуществляет­ся за счет отнятия у тканей воды и коагуляции белков. Не­смотря на ряд отрицательных свойств спирта (сморщивание клеток в результате быстрого отнятия воды, растворение и экстракция жиров и гемоглобина), он как фиксатор нахо­дит широкое применение в микроскопической технике. Это объясняется тем, что этиловый спирт осуществляет быструю фиксацию, не требующую после себя обезвоживания тканей перед заливкой в парафин и целлоидин. Будучи химически неактивным веществом, спирт особенно пригоден при гисто­химических исследованиях. В нем полностью сохраняются такие вещества, как муцины, гликоген, мочевая кислота, же­лезо, кальций, которые легко растворимы в других фикси­рующих жидкостях.

Этиловый спирт применяется чаще в виде 96° и абсолют­ного спирта. Некоторые авторы рекомендуют также кон­центрации 80 и 90°. Время фиксации зависит от материала: для тонких пленок 15-30 минут, для кусочков толщиной 3-4 мм -2-4 часа. В связи с тем что спирт легче воды, последняя, экстрагируясь из тканей, опускается на дно. Поэтому под кусочки исследуемого материала нужно обя­зательно подкладывать толстый слой ваты. Излишнее пре­бывание препарата в спирте вызывает чрезмерное уплотне­ние ткани, что плохо отражается на последующей ее обра­ботке.

Метиловый спирт (метанол). Бесцветная жидкость, в чи­стом виде напоминает по запаху этиловый спирт, техниче­ский же (неочищенный) метанол обладает неприятным за­пахом, обусловленным примесью других веществ. В микро­скопической технике применяется в виде абсолютного, лишенного примесей спирта, для фиксации мазков крови. Лучше всего пользоваться метанолом, предназначенным для анализа.

Следует помнить, что метанол является сильным ядом и требует соблюдения правил употребления и хране­ния, предусмотренных для ядовитых веществ группы А. Из других фиксирующих веществ следует упомянуть аце­тон, сулему, соли тяжелых металлов (ртуть, кобальт, пла­тина, уран и т. д.) и кислоты (уксусная, трихлоруксусная, пикриновая, осмиевая, хромовая и Др.). В чистом виде эти вещества применяются редко, но зато являются составной частью многих фиксирующих смесей.