Материалы и оборудование:

1. Разбавленная сперма.

2. Обезжиренные предметные стекла

3. Шлифовальные стекла

4. Покровные стекла

5. Спирт-эфир

6. Дистиллированная вода

7. Фильтровальная бумага

8. Раствор эозина (1-2 %)

9. Физиологический раствор

10. Канадский бальзам или полистирол.

Техника изготовления препарата - мазка спермы:

На предметное стекло нанести каплю спермы диаметром 2-5 мм. С помощью шлифовального стекла сделать мазок. Мазок высушить на воздухе (15-20 мин)

Фиксация мазка: на высушенный мазок нанести несколько капель спирт эфира и дать ему полностью испариться. Окраска мазка: мазок покрыть узкой полоской фильтровальной бумаги и нанести на нее несколько капель эозина (5-10 мин). Удалить фильтровальную бумагу и смыть излишек краски водой. Излишек воды оттянуть фильтровальной бумагой и просушить ма­зок на воздухе.

На высушенный мазок нанести каплю бальзама или полистирола и покрыть покровным стеклом.

Изготовление гистопрепаратов из эпителиальных клеток слизистой щеки

Хороший препарат для просмотра под микроскопом получается также из изолированных эпителиальных клеток слизистой оболочки ротовой полости. Чтобы получить такой препарат, наносят на чистое предметное стекло каплю физиологического раствора. Затем берут скальпель и про­тирают его спиртом для дезинфекции. Потом ручкой скальпеля слег­ка соскабливают внутреннюю поверхность щеки или твердого нёба животного. Полученный соскоб переносят в каплю физиологического раствора на предметном стекле и красят метиленовой синькой 3-5 мин. После этого каплю накрывают покровным стеклом и препарат изучают под микроскопом.

При малом увеличении микроскопа в поле зрения видны пласты эпителиальных клеток, но встречаются и отдельные изолированные клетки: 1 – плоские эпителиальные клетки поверхностного слоя; 2 – цилиндрические клетки глубокого слоя; 3 – лейкоциты; 4- эритроциты. Поставив изолированную эпителиальную клетку в центр по­ля зрения, переводят микроскоп на большое увеличение. Обращают внимание на форму и величину клеток.

Изучая строение клеток под микроскопом, нужно сделать зари­совки в своих рабочих тетрадях.

Вопросы для самопроверки

1. Определение гистологии как науки.

2. Объекты исследования гистологии.

3. Перечислите основные свойства микроскопического препарата.

4. Назовите основные этапы изготовления гистологического препарата.

5. Какие группы красителей используют в гистологической практике?

6. Чем отличаются временные гистологические препараты от постоянных?

7. Объясните принцип работы на микротоме?

8. Техника приготовления тотальных препаратов.

Занятие 2. Микроскопическая техника

Цель занятий:

1. На основе знания устройства светового микроскопа закрепить технику микроскопирования. Типы микроскопов.

2. Ознакомиться с правилами оформления лабораторной работы.

Методы исследования

Современная гистология располагает большим арсеналом средств для изучения биологических структур на всех уровнях их организации – клеточном, тканевом, органном. Основными объектами исследования являются гистологические препараты или их фотографии, классическим методом – микроскопирование.

Световая микроскопия наиболее распространенный способ изучения гистологических структур. Современные биологиче­ские микроскопы дают максимальное (до 2500 раз) увеличение (произведение увеличения объектива на увеличение окуляра).

Люминесцентная микроскопия позволяет наблюдать флуорес­ценцию (свечение) ряда веществ и структур, возбуждаемую ульт­рафиолетовыми и сине-фиолетовыми лучами спектра. Флуорес­центная микроскопия является методом прижизненного наблюде­ния клеток. Она позволяет не только рассмотреть ряд структур в них, но и определить их химический состав.

Электронная микроскопия – это метод изучения субмикро­скопических структур клетки. В электронном микроскопе роль линз выполняют электромагниты, фокусирующие пучок электро­нов на препарат. Объект рассматривают на светящемся экране или фотографируют. Разрешающая способность электронного микроскопа примерно в 100 раз больше, чем светового, что дает возможность исследовать клеточные структуры на молекулярном уровне.

Цитохимические методы позволяют выяснить химическую природу клеточных структур и характер распределения тех пли иных веществ в клетке. Разработаны методы цитохимическо­го анализа основных соединений, входящих в состав структур клетки (белков, нуклеиновых кислот, углеводов, ферментов).

Задание 1. Изучить устройство светового микроскопа, являющегося постоянным рабочим инструментом при изучении курса гистологии и записать в тетрадь основные его части. Научиться пользоваться микроскопом.

Микроскоп – оптический прибор, предназначенный для изуче­ния прозрачных объектов, невидимых простым глазом. В световых биологических микро­скопах различают две основные части: механическую и оптическую (рис. 5А).

Рис.5. Микроскоп для биологических исследований.