Практическое задание Методы исследования мышечной ткани

Окрашивание железным гематоксилином по Гейденгайну. Сначала производят окрашивание железным гематоксилином по Гейденгайну, затем срезы скелетной или сердечной мышечной ткани можно докрасить 0,5% водным раствором тиазинового красного, далее осуществляются их ополаскивание дистиллированной водой, обезвоживание, заключение в ксилол, бальзам.

Результат окрашивания: миофибриллы темно-синие, соединительная ткань и сарколемма интенсивно-красные, вставоч­ные диски и хроматин черные.

Окрашивание проводящих кардиомиоцитов пикриновой кислотой - тиазиновым красным по Домагку.

Приготовление растворов. 1. Насыщенный раствор пикриновой кислоты: 30-50 г пикриновой кислоты всыпают в 1-2-литровую бутылку. Бутылку заполняют горячей дистиллированной водой, энергично встряхивают и дают остыть. При комнатной температуре в 1 л воды растворяется 12 г пикриновой кислоты, так, чтобы в остывшем растворе на дно осаждались нерастворенные кристаллы.

2. Раствор пикриновой кислоты - тиазинового красного: к 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты добавляют 7,5 мл 1% водного раствора тиазинового красного.

Методика окрашивания: 1) окрашивают ядра железным гематоксилином Вейгерта 2 мин; 2) промывают в водопроводной воде 10 мин; 3) окрашивают пикриновой кислотой - тиазиновым красным 3-5 мин; 4) ополаскивают в дистиллированной воде; 5) обезвоживают, заключают в ксилол, бальзам.

Результат: ядра темно-коричневые, соединительная ткань ярко-красная, мышечная ткань желтая. Волокна Пуркинье хорошо выделяются более светлым тоном.

Изоляция гладких миоцитов. Маленькие кусочки гладкой мышечной ткани помещают в 33% раствор КОН. Через 1-2 ч в этом же растворе их разделяют препаровальными иглами на мелкие фрагменты. При удачной мацерации эти фрагменты распадаются на отдельные веретеновидные клетки уже от давления покровного стекла.

Окрашивание гладкой мышечной ткани на срезах ализариновым синим по Нейберту.

Приготовление растворов. 1. Раствор ализаринового синего: к 100 мл дистиллированной воды прибавляют 10 г химически чистого сульфата алюминия и 0,5 г кислотного ализаринового синего, кипятят 5-10 мин, затем доливают до 100 мл дистиллированной водой и фильтруют.

2. Водный раствор ацетата меди (2,5% или иной - концентрацию раствора и время пребывания в нем подбирают опытным путем).

3. 5% раствор фосфорновольфрамовой кислоты.

Методика окрашивания:

1) срезы из дистиллирован­ной воды переносят на 3-5 мин в раствор ализаринового синего, который в зависимости от плотности препарата в большей или мень­шей степени разводят дистиллированной водой;

2) дифференцируют и протравливают срезы в 5% фосфорновольфрамовой кислоте;

3) ополаскивают в дистиллированной воде;

4) помещают на 5-30 мин в раствор ацетата меди (в зависимости от концентрации раствора и толщины срезов;

4) промывают в водопроводной воде;

5) обезвоживают, просветляют в кислоте, заключают в бальзам.

Результат: гладкая мышечная ткань окрашивается в синий цвет.