Гистологическая техника для приготовления гистологических препаратов

Для получения тонких срезов, пригодных для гистологического исследования, используют специальные приборы, называемые микротомами. Для резания парафиновых и целлоидиновых блоков применяют санные и ротационные микротомы. Санными называются микротомы, у которых нож и объектодержатель помещаются на салазках и скользят по рельсам. В санном микротоме различают станину, в верхней части которой имеются две или три шлифованные поверхности (рельсы), по которым двига­ются ножевые салазки (рис. 3). На боковой поверхности распола­гаются пластины, по которым двигаются объектные салазки. Микрометрический винт представляет собой стержень с нарезкой, служащий для подачи блока под нож. Установив на спе­циальной шкале определенное количество делений, можно регули­ровать толщину срезов (т.е. высоту, на которую микрометрический винт подает объект после каждого среза). Блок закрепляют в объектодержателе – зажиме для блока, расположенном на объектных салазках. Зажим чаще всего состоит из 2 рамок: наружной и внутренней. Блок зажимают на внутренней рамке между ее неподвижной стенкой и скользящей щечкой. Рамки могут совершать качательные движения по переднезадней и поперечной оси, что позволяет расположить верхнюю поверхность блока гори­зонтально. Каждая рамка имеет свой винт и свою ручку-фиксатор для закрепления в желательном положении. В передней части сала­зок объектодержателя имеется металлическая пластинка, в которой находится канал для стержня объектодержателя. Стержень закре­плен в канале винтом, отпуская который можно поднимать и опус­кать объектодержатель. Ножевые салазки (ползун) снабжены зажимом для ножа. Зажим позволяет зафиксировать нож под определенным углом к плоскости резания.

Приготовление замороженных срезов. Замороженные срезы получают с помощью замораживающих микротомов или в криостате. Замораживающий микротом снабжен замораживающим столи­ком, на котором замораживается объект. В столике имеются камера и приспособление для подачи в камеру углекислоты, соеди­ненное специальным шлангом с баллоном, в котором находится углекислота. Баллон закрепляется вверх дном в вертикальном поло­жении на специальной подставке. Вместо углекислотной установки для замораживания тканей может быть использован термоэлектри­ческий охлаждающий столик (ТОС). Более быстро и лучшего качества срезы можно получить в криостате. Криостат представ­ляет собой холодильник, в котором поддерживается температура минус 5°С - 40°С. Чаще всего рабочей температурой является тем­пература минус 14°С – минус 20°С. В холодильник вмонтированы микротом (криотом), имеется освещение. В передней стенке криостата имеется окошечко, в боковых стенках – отверстия с рукавами для рук оператора. Микротом в криостате обычно ротационный, ткани примораживаются к латунным держателям, держатель фик­сируется на специальном стержне. Микротомный нож закреплен неподвижно, а объект при резке подводится к ножу. Существуют различные методы дальнейшей обработки срезов: 1) срез снимают на теплое (с температурой, равной комнатной) или холодное (с тем­пературой, равной температуре криостата) покровное или предмет­ное стекло и фиксируют в момент таяния; 2) срез снимают на теплое или холодное покровное или предметное стекло, дают ему оттаять и подсушивают на воздухе, после чего он может быть фиксирован или не фиксирован в зависимости от дальнейшего исследования; 3) срез переносят в теплый или холодный раствор реактива (инкубацион­ной среды при гистохимическом исследовании ферментов); 4) срез переносят в банку с теплым или холодным фиксатором; 5) срез подвергают лиофильной сушке.

Микротомные ножи бывают прямые (когда обе сто­роны ножа плоские) и плосковогнутые (одна сторона плоская, дру­гая – вогнутая). Первые применяются для получения парафино­вых, вторые – для получения целлоидиновых срезов. Кроме того, существуют двояковогнутые микротомные ножи. В месте пересече­ния плоскостей широких поверхностей микротомного ножа образу­ется угол, называемый углом лезвия (см.рис.3). Микротом­ные ножи затачиваются под углом, большим, чем угол лезвия, и этот угол заточки называется режущим углом. Плоскости заточек микротомного ножа, образующие режущий угол, получили назва­ние фасеток. Ширина фасеток должна быть 1,5-2 мм.

Точка микротомных ножей имеет важное значение в работе лаборанта-гистолога, так как именно от состояния ножа зависит качество среза. Ножи подвергают электролитической точке либо точат на точильных камнях. Электролитическая точка основана на растворении металла в электролите под дей­ствием электрического тока. При этом режущий край истончается и образуется фасетка. Точка на точильных камнях производится на брусках бельгийского камня с мелким зерном и затем на белом камне – арканзасе с еще более мелким зерном. На стержень ножа надевают ручку, а на спинку прямого ножа – обушок. Плосковогнутые ножи точат с направителем, наложенным на плоскую поверхность, а двояковогнутые ножи – без обушка и без направителя. У каждого ножа должен быть свой постоянный обу­шок или направитель. Точку производят на смазочном вазелиновом масле

Рис.3. А: 1 – станина; 2 – ножевые салазки с ножом; 3 – микрометрический винт; 4 – рамка с ограничи­телем; 5 – объектные салазки с объектодержателем Б: а – угол лезвия; б – режущий угол; в – верхний угол скоса; г – нижний угол скоса; д – угол наклона лезвия.

или воде. Чем плотнее среда, на которой точится нож, тем точка идет медленнее, но фасетка получается ровнее. Можно начинать точку на воде, а заканчивать на масле. Точат нож на камне, начиная от ручки, всегда продвигая лезвием вперед Лезвие ножа ведут от одного края бруска до другого так, чтобы через этот последний край нож прошел своим концом, затем перевертывают нож через обушок и таким же образом проводят другой стороной ножа по бруску. Нож должен идти

а

Б

Рис.4. Заточки микротомных ножей. А – инструмент для заточки микротомных ножей: а – ручка; б – обушок для точки микротомного ножа; Б – порядок вождения микротомного ножа по точильному камню.

свободно. Давить на него не следует. Качество заточки ножа контролируют под микроскопом. После бельгийского камня точат на белом камне – арканзасе. Время точки ножа зависит от его состояния и твердости стали. Если на ноже есть глубокие зазубрины, точка может зани­мать несколько часов, при хорошем состоянии ножа – 20-30 мин. После точки на камне нож правят на ремне. При этом пользуются широким ремнем с войлочной прокладкой, натянутой на деревян­ную колодку. Нож при правке ведется обушком вперед и перевора­чивается также через обушок, чтобы не испортить режущий край.