Вопросы для самопроверки

1. Определение и компоненты ткани.

2. Генетическая и морфофункциональная классификация ткани.

3. Назовите эмбриональные источники развития эпителиев в онтогенезе.

4. Понятие и морфофункциональные особенности эпителиальной ткани.

5. Классификация эпителиев.

6. Какие типы клеток различают в составе однослойного многоядерного эпителия?

7. Дайте характеристику многослойных эпителиев.

8. Из каких слоёв состоят многослойные плоские ороговевающий и неороговевающий эпителии?

9. Укажите особенности строения, свойства, место расположения переходных эпителиев.

10. Охарактеризуйте железистый эпителий.

11. Морфофункциональная характеристика экзо- и эндокринных желез.

12. Какие существуют типы и способы секреции?

Занятие 11. Практическое занятие

Цели занятия:

1. Изучить методы исследования эпителиальных тканей.

2. Изучить методы исследования крови и кроветворения.

Изоляция эпителиальных клеток и их окрашивание. Изоляцию клеток лучше всего проводить в 30% спирте. Небольшие кусочки нефиксированного органа (например, трахеи) помещают в небольшой объем спирта (превышающий объем материала не более чем в 3 раза) и оставляют на 12-24 ч. После этого изоляция достигается уже при встряхивании или при легком поколачивании материала препаровальной иглой. Затем несколько капель мацерированной ткани размазывают препаровальной иглой по предметному стеклу, влажный мазок помещают на 20-30 мин в жидкость Буэна, далее в 50% спирт, дистиллированную воду, окрашивают гематоксилин-эозином или азур-2-эозином. Кусочек ткани после мацерации до выделения клеток можно тотально окрасить квасцовым кармином в течение 0,5-12 ч.

Приготовление красителя: в 100 мл горячей дистиллированной воды растворяют 6 г хромовых квасцов, добавляют 1 г кармина, помешивают 15 мин, кипятят и после их охлаждения фильтруют.

После окрашивания следуют основательная промывка в дистиллированной воде, выделение клеток, обезвоживание, помещение в ксилол, бальзам.

Результат: ядра черно-синие, цитоплазма бледная сине-фиолетовая.

Методы исследования крови и кроветворения

Взятие крови и приготовление мазка. Для взятия крови используют стерильные ланцетовидные иглы, которые быстрым движением вкалывают на глубину 2-3 мм в протертый спиртом кончик пальца. Первую каплю крови стирают, к следующей прикасаются концом обезжиренного предметного стекла. Затем предметное стекло с каплей крови помещают на стол таким образом, чтобы конец стекла с каплей был справа. Шлифованное покровное стекло ставят слева от капли под углом 45° к предметному стеклу и слегка пошеве ливают, чтобы капля растеклась вдоль покровного стекла. Тогда легким равномерным движением покровного стекла справа налево по предметному стеклу размазывают каплю крови.

Красный костный мозг у человека берут из грудины шприцем с толстой иглой. У мелких грызунов обнажают бедренную кость, вскрывают ее и добывают кусочек красного костного мозга. Из костного мозга делают мазки, но в отличие от крови при приготовлении мазка костного мозга материал находится не позади покровного стекла, а впереди него, так как размазывание костного мозга требует большего усилия.

Мазки высушивают на воздухе и фиксируют в метиловом спирте 3-5 мин. Стекла с мазками вынимают из спирта пинцетом и ставят вертикально на фильтровальную бумагу для высушивания.

Окрашивание мазков крови и красного костного мозга по Романовскому-Гимзе. Продажную краску Романовского-Гимзы разводят из расчета 2 мл краски на 23 мл дистиллированной воды. Фиксированные мазки помещают на две стеклянные палочки, положенные параллельно друг другу, заливают краской и оставляют на 30 мин. Далее краску смывают с мазка водопроводной или дистиллированной водой. От водопроводной воды мазок может слишком посинеть, а дистиллированная вода при длительном промывании смывает краску, поэтому лучше быстро смыть краску дистиллированной водой. Мазки высушивают на воздухе. Далее их можно исследовать с иммерсией, не заключая в бальзам. В случае необходимости высушенные мазки можно заключить в бальзам.

Результат: ядра красновато-фиолетовые, зернистость эозинофилов розовая, зернистость базофилов красно-фиолетовая, зернистость нейтрофилов бледно-розовая, цитоплазма лимфоцитов голубая, цитоплазма моноцитов серовато-голубоватая, кровяные пластинки фиолетовые.

Прижизненное окрашивание геморетикулоцитов бриллиантовым крезиловым синим по Сейфарзу. 1% раствор бриллиантового крезилового синего на абсолютном спирте размазывают тонким слоем по обезжиренному предметному стеклу и высушивают. Затем на подготовленном таким образом стекле делают мазок крови и, не давая ему высохнуть, быстро переносят в хорошо закрывающуюся чашку Петри, обложенную влажной фильтровальной бумагой. Через 5-15 мин стекло извлекают и высушивают на воздухе.

Результат окрашивания: в геморетикулоцитах видны сине-фиолетовые нити и гранулы. После 24-часового высушивания на воздухе мазок можно фиксировать метиловым спиртом и докрасить по Романовскому-Гимзе.

Подсчет лейкоцитарной формулы крови. Последовательно продвигая препарат сверху вниз и слева направо, подсчитывают в каждом поле зрения количество лейкоцитов. Каждый лейкоцит отмечается в соответствующей графе схемы палочкой, затем палочки подсчитывают. Общее число подсчитанных клеток должно быть не менее 100. Полученные данные суммируются в каждой графе таблицы, и производится подсчет процентного содержания каждого вида лейкоцитов, при этом за 100% принимают общее число подсчитанных лейкоцитов.

Необходимо рассчитать процентное содержание каждого вида лейкоцитов, сравнить их с нормой и оценить обнаруженные отклонения.

Исследование свежих мазков. Покровным стеклом прикасаются к верхушке свежей капли крови, накладывают его на предметное стекло. При этом капля растекается. Для защиты от высыхания покровное стекло окантовывают кисточкой, обмакнутой в расплав­ленный парафин. Если мазок подсыхает, то дискоциты часто агглю­тинируются, образуя «монетные столбики».

Бензидиновый метод выявления пероксидазы. Этот метод может быть использован в качестве примера выявления активности ферментов в лейкоцитах на мазках крови. Для фиксации мазков крови можно использовать 10% спиртовой раствор формалина 1-2 мин (по Грэхему).

Приготовление раствора бензидина. 0,5 г бензидина растворяют при встряхивании в 100 мл дистиллированной воды, фильтруют и добавляют 2 мл 1% перекиси водорода на каждые 100 мл фильтрата; 1% перекись водорода приготовляют, разводя в 30 раз ее 30% раствор.

Методика проведения реакции: 1)в бензидин-перекисной смеси окрашивают мазки 5-10 мин; 2) промывают в воде; 3) быстро докрашивают 0,5% раствором метилового синего; 4) промывают в воде; 5) высушивают мазки и исследуют с иммер­сией или заключают в бальзам.

Результат: в местах локализации пероксидазы - желтые или коричневые гранулы, ядра синие.