Окрашивание жиров и липидов

Термин «липиды» собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества, экстрагируемые растворителями жиров (бензин, эфир, хлороформ и др.).

В основе методов окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, крася­щие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды.

Окраска Суданом III является наиболее распро­страненным методом выявления жира – окрашивает липиды в оранжевый цвет; Судан черный – чёрным цветом.

Приготовление раствора красителя

В 100 мл горячего 70° спирта засыпают 0,2-0,3 г порошка судана III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при 58°) на несколько часов, затем охлаждают и фильтру­ют.

Метод: 1. Замороженные срезы (из свежей или фикси­рованной в формалине ткани) на несколько минут перено­сят из воды в 50 ° спирт.

2. Помещают в спиртовой раствор красителя на 15-30 минут (бюксы следует закрывать, так как испарение спирта приводит к выпадению осадков красителя).

3. Быстро ополаскивают в 50° спирте.

4. Промывают в дистиллированной воде.

5. Подкрашивают ядра кислым гематоксилином.

6. Промывают и заключают в желатину или глицерин-желатину (обезвоживание в спиртах экстрагирует жиры).

Результат. Жировые вещества интенсивно оранже­вого цвета, ядра – синие. Препараты выцветают сравни­тельно скоро, поэтому откладывать исследование не реко­мендуется.

Окраска шарлахом. Красители: в смесь из 50 мл ацетона и 50 мл 70° спирта засыпают 0,2-0,3 г шарла­ха. Хорошо закрывают и взбалтывают. Полученный раствор перед употреблением фильтруют.

Метод: 1. Замороженные срезы из свежей или фиксиро­ванной в формалине ткани помещают в 50° спирт на 2-4 минуты.

2. Окрашивают в растворе красителя 2-3 минуты.

3. Быстро споласкивают в 70° спирте.

4. Промывают в воде.

5. Подкрашивают ядра кислым гематоксилином.

2. Промывают в воде и заключают в глицерин или гли­церин-желатину.

Результат. Жировые вещества оранжево-красные. Ядра – синие.

Выявление гликогена кармином по методу Беста (фиксаторы Буэна, Карнуа, спирт, формалин и пр.)

Несмотря на то, что этот метод чисто эмпирический и не отвечает строгим гистохимическим требованиям, он широко распространен в гистохимической и гистологической практике благодаря яркости окраски и практически неограниченными требованиями в отношении фиксаторов (последнее особенно важно).

Заливка материала любая, но парафиновые и целлоидинпарафиновые срезы требуют целлоидиновой защиты.

Приготовление рабочих растворов

Основной раствор кармина. Растворить в 60 мл дистиллированной воды 2 г кармина, 1 г углекислого калия и 5 г хлористого калия. Полученный раствор кипятить в течение 5 минут (не допуская бурного кипения), охладить и отфильтровать. Затем добавить к фильтрату 20 мл 28% раствора аммиака. Хранящийся в холодильнике при 0-4° раствор годен в течение 3 месяцев.

Раствор кармина для окрашивания. Слить 8 мл основного раствора, 12,5 мл аммиака (удельный вес 0,880) и 24 мл метанола (раствор годен 1-2 недели).

Раствор Беста для дифференцировки. К 8 мл абсолютного спирта добавить 4 мл метанола и 10 мл дистиллированной воды.

Метод окрашивания (парафиновые срезы).

1. Довести срезы до абсолютного Спирта.

2. Поместить в 1 % раствор целлоидина на 2-5 минут.

3. Высушить на воздухе.

4. Довести через спирты до воды.

5. Окрасить гематоксилином Эрлиха 5 минут.

6. Ополоснуть в воде и отдифференцировать окраску ядер в 1 % подкисленном спирте.

7. Ополоснуть в дистиллированной воде.

8. Поместить в карминовый раствор для окрашивания на 15-30 минут.

9. Дифференцировать в растворе Беста (не ополаскивая предварительно в воде) от 5-10 секунд до нескольких минут, пока не перестанут отходить облачка красителя (если раствор быстро загрязнился, то сменить).

10. Промыть в 80° спирте.

11. Обезводить, просветлить и заключить в бальзам. При окраске целлоидиновых срезов первые три этапа опускаются, так как они предназначены для обеспечения целлоидиновой защиты срезов.

Результат. Ядра темно-синие, гликоген ярко-красный.

Примечание. В связи с тем, что в состав красителя входит аммиак, окраску следует производить в плотно закрывающихся сосудах.

Контрольные срезы обрабатывают диастазой так же, как при ШИК-реакции.