Заливка в целлоидин - парафин

Этот метод сочетает в себе преимущества парафиновой и целлоидиновой заливок. Применять его рекомендуется при обработке:

1) нежных объектов, которые легко сжимаются при парафиновой заливке (мезенхимная ткань, органы кроветворений и др.);

2) органов, которые расслаиваются при резке в парафиновом блоке (трахея, кожа и др.).

Метод. Промывка и обезвоживание стандартные. Из безводного спирта материал помещают в смесь из равных частей спирта с эфиром (4-20 часов), а затем в 2% раствор целлоидина. После полного пропитывания (24-48 часов) объект переносят в чистый хлороформ, где он находится до тех пор, пока не погрузится под его поверхность (30 минут-1 час). Затем материал на такое же время переносят в свежую порцию хлороформа (время подбирают в зависимости от размера кусочков и свойства материала). После этого объект промокают фильтровальной бумагой и переносят в растопленную смесь хлороформа с парафином, в которой держат 20 минут при температуре 58° (после погружения кусочка сосуд можно оставить на столе до утра и даже на несколько дней). Последующее пропитывание и заливка, как при обычном парафиновом методе.

Существует модификация этого метода, согласно которой пропитывание материала ведется в смеси из равных частей 2% раствора целлоидина и касторового масла 1-3 дня. Затем объект переносят в хлороформ, который сменяют трижды через 1 час (для удаления касторового масла). Последующие этапы, как и при парафиновой заливке. Этот метод рекомендуется применять для заливки плот­ных тканей (кожа, трахея).

Заливка в желатину

Метод пригоден для эмбриологических исследований, заливки рыхлых тканей и органов (не вызывает сморщивания), при исследованиях с целью выявления жиров и липоидов. Режут желатиновый блок только на замораживающем микротоме.

Для заливки приготавливают два раствора: а) 25% раствор; 25 г размельченной или порошкообразной желатины растворяют в водяной бане (при 37°) в 75 мл 1 % карболовой воды (во избежание испарения сосуд должен быть закрыт); б) 12,5% раствор: 1 часть густого раствора разбавляют 1 частью теплой 1 % карболовой воды. Для приготовления последней в 100 мл дистиллированной воды растворяют 1 г карболовой кислоты при постоянном взбалтывании.

Приготовленные растворы желатины разливают в отдельные пробирки или другие небольшие сосуды порциями, пригодными для одной заливки (раствор используется однократно, так как повторное расплавление ухудшает застывание), и плотно закрывают пробкой.

Метод. Тщательно отмытый от фиксатора материал переносят для пропитывания сначала в жидкий (12,5%) раствор желатины на 3-20 часов (в зависимости от толщины и свойств объекта), затем на такой же срок в густой (25%) раствор (всю процедуру производят в термостате при 37°, в хорошо закрытых пробками баночках во избежание испарения воды и загустевания желатины, после чего заливают свежей порцией 25% раствора желатины), помещают в предварительно подогретые формочки и охлаждают в воде, внимательно следя, чтобы она не попала в желатину (летом воду следует предварительно остудить в холодильнике). После затвердения желатины из нее вырезают квадратные блоки, которые для уплотнения помещают на 24 часа в 20-25% раствор формалина и затем хранят в 10% растворе формалина.

Если уплотнение блока в формалине начинают слишком рано, то он делается скользким или ломким. Для удаления желатины из срезов их помещают в 10% раствор едкого кали (КОН) на 30 минут и держат в термостате 37-40°. Потом срезы основательно промывают в водопроводной воде и окрашивают. Полного удаления желатины из срезов при этом не достигается.