Фиксирующие смеси (сложные фиксаторы) и их применение

Жидкость Мюллера. В настоящее время при­менение ее в чистом виде ограничено. Однако она служит исходным раствором для приготовления таких распростра­ненных фиксаторов, как жидкость Ценкера, Орта, Макси­мова и др. Состав:

двухромовокислый калий 2,5 г сернокислый натрий 1 г

дистиллированная вода 100 мл

Для лучшего растворения бихромата калия рекоменду­ется подогревать воду.

Жидкость Ценкера (сулемовая смесь). Один из лучших фиксаторов для приготовления обзорных препара­тов и препаратов для ряда тонких гистологических исследо­ваний. Обеспечивает хорошую окрашиваемость тканей. Со­став и способ употребления:

жидкость Мюллера 100 мл

сулема (НgСL₂) 5 г

ледяная уксусная кис­лота 5 мл

(прибавляется непосредственно перед употреблением; может быть заменена равным количеством формалина по Гелли).

Толщина фиксируемых кусочков не должна превышать 5 мм. Время фиксации 1-24 часа в зависимости от толщины и свойств объекта.

Последующая обработка. После тщательного промывания в проточной воде в течение 20-24 часов (вода должна стать бесцветной) кусочки помещают в 70° йодиро­ванный спирт для удаления из тканей осадков сулемы. С этой целью к 70° спирту прибавляют несколько капель 90° спирта, содержащего в 100 мл 2 г йода и 3 г йодистого калия, до получения раствора Цвета крепкого чая. Отмывание сулемы ведут в нескольких порциях йодированного спирта, меняя его через 18-24 часа до прекращения просветления (растворение осадка сулемы, обесцвечивает спирт).

После фиксации жидкостью Ценкера рекомендуется заливка в целлоидин или целлоидин-парафин, так как заливка в парафин приводит к значительному сжатию и смор­щиванию тканевых структур.

Жидкость Максимова (ценкер-формол). Фактически представляет видоизмененную жидкость Ценкера, где ледяная уксусная кислота заменена формалином. Фиксатор широко применяется для гематологических исследований. Дает хорошее окрашивание клеток крови и позволяет выявлять их специфичную зернистость.

Состав и способ употребления:

Жидкость Мюллера	двухромовокислый калий	2,5г
	сернокислый натрий	1г
	дистиллированая вода	100мл
	сулема	5г
	формалин	10мл

Время фиксации 6 часов. Толщина кусочков не больше 5 мм. Дальнейшая обработка и заливка те же, что и после фиксации в жидкости Ценкера.

Если к жидкости Максимова добавить 10 мл 2% раство­ра осмиевой кислоты и увеличить время фиксации до 24 ча­сов, можно одновременно получить осмирование жира.

Фиксация по Навашину-Крылову

Фиксация этим методом дает хорошие результаты при окраске ядер и протоплазматических структур железным гематоксилином. Состав фиксатора Навашина и способ упо­требления:

раствор хромовой кислоты 1%	10 мл
формалин 10%	10 мл
вода дистиллированная	90 мл
ледяная уксусная кислота (добавляется непосредственно перед фиксацией)	2 мл

Кусочки толщиной 5 мм следует фиксировать 4-6 ча­сов, затем тщательно промыть в проточной воде (24-36 часов) для удаления хромовой кислоты, остатки которой ухуд­шают окраску препаратов.

Г. И. Крылов предложил перед промывкой проводить кусочки через несколько порций 5-10% формалина до прекращения желтого окрашивания раствора (формалин извлекает хромовую кислоту из тканей). Эта процедура сокращает сроки промывания в воде.

Жидкость Буэна. Является одним из лучших жид­ких фиксаторов. Относительно быстро проникает в ткани, вызывая незначительное (на 2,5%) их сжатие. Очень хоро­шо окрашивает тканевые структуры. Применяется как для обзорных препаратов, так и для тонких исследований, а так­же для фиксации эмбрионов.

Состав и способ употребления:

насыщенный раствор пикри­новой кислоты 75 мл

формалин 25 мл

ледяная уксусная кислота 5 мл

Сливание перечисленных жидкостей производится непосредственно перед фиксацией. Так как пикриновая кислота плохо растворяется в воде, ее насыщенный раствор необходимо готовить заранее. В сосуд насыпают 25-30 г кристаллической кислоты и заливают 1 л горячей дистиллированной воды. Избыток кислоты при охлаждении выпадает в осадок и может быть использован при приготовлении но­вой порции раствора. Раствор можно хранить неограниченно долго.

Продолжительность фиксации материала 2-24 часа в зависимости от величины объекта. Однако и более длительное (до нескольких суток) пребывание кусочков в фиксаторе не ухудшает качество фиксации и последующей обработки.

После фиксации материал переносят в 70-80° спирт (для удаления пикриновой кислоты), который сменяют 2-3 раза. Заливка в парафин.

Примечание. Объект, фиксированный в жидкости Буэна, не пропитывается полностью целлоидином.

Жидкость Карнуа. Служит хорошим фиксатором, как для гистологических исследований (ядра), так и для многих гистохимических методик (нуклеиновые кислоты, белки, полисахариды). Недостатком является легкое сморщивание цитоплазмы и соединительной ткани.

Состав и метод применения:

абсолютный этиловый спирт 60 мл (при отсутствии можно заменить 96° спиртом)

хлороформ 30 мл

ледяная уксусная кислота 10 мл

Жидкость Карнуа приготавливается перед фиксацией. Кусочки толщиной до 5 мм фиксируют в течение 1-5 часов (в зависимости от толщины объекта). После фиксации кусочки сразу переносят в абсолютный спирт (если фиксатор был приготовлен на 96° спирте, то кусочки следует ополоснуть 2-3 раза в 96° спирте, где в случае необходимости можно оставить на 2-3 часа).

Примечание. Надо следить, чтобы материал находился в фиксаторе не дольше, чем это нужно для полного его пропитывания, так как удлинение фиксации усиливает сжатие и уплотнение объекта.

Жидкость Шаффера – фиксатор, состоящий из 2-х частей 90° или абсолютного спирта и 1 части формалина. Продолжительность фиксации – от 1-2 дней до нескольких суток. Из фиксатора материал сразу же переносят в 90° или абсолютный спирт. Фиксатор Шаффера является универсальным, а при гистохимических исследованиях специально используется для выявления белков.

Жидкость Чаччо составляют смешиванием 80 мл 5% водного раствора бихромата калия, 20 мл формалина и 5 мл ледяной уксусной кислоты. Маленькие кусочки фиксируют в течение 48 часов. Жидкость применяют для фиксации жиров и липоидов.

Жидкость Бэккера приготовляют путем добавления к 80 мл дистиллированной воды 1 г хлористого кадмия, 30 мл 10% раствора хлористого кальция и 10 мл продажного формалина. Кусочки можно фиксировать от 1 до 5 недель. Вслед за этим в некоторых случаях рекомендуется обработать материал в течение 24-48 часов 3% раствором двухромовокислого калия. Вместо хлористого кадмия можно использовать азотнокислый кобальт в той же концентрации. Фиксатор рекомендуется для гистохимического определения липидов.

Фиксатор Лилли составляется из 8 г нитрата свинца, 10 мл продажного формалина, 10 мл воды и 80 мл этилового спирта. При комнатной температуре материал фиксируют 24 часа, при температуре 4°С – 2-3 дня, при температуре 25°С – 10-14 дней. Фиксатор используют при гистохимическом выявлении мукополисахаридов и мукопротеидов.