Оценка транспортной функции сывороточного альбумина

Принцип метода Определяют содержание альбумина в сыворотке крови и количество альбумина, связывающегося с раствором конго красного, после чего вычисляют процент альбумина, связанного с красителем. Альбумин является неспецифическим транспортером веществ, его связывающая способность важна для оценки фармакокинетики и фармакодинамики лекарств.

Реактивы, исследуемый материал:

1) кристаллический альбумин человека; 2) конго красный, 0,1% раствор; 3) №С1, насыщенный раствор; 4) №С1, 0,9% раствор.

Ход работы

1. Готовят реагенты для построения калибровочного графика связывания красителя со стандартным раствором альбумина, содержащим 100; 75; 50; 25; 6,25 и 3,125 г альбумина в 1 л 0,9% раствора N301. К 5 мл 0,1% раствора конго красного добавляют по 0,1 мл раствора альбумина из каждого разведения.

2. В 5 мл 0,1% раствора конго красного помещают 0,1 мл исследуемой сыворотки. Через 30 мин в пробирки добавляют по 5 мл насыщенного раствора №С1 и помещают на 24 ч в термостат при 37 "С . Затем содержимое пробирок фильтруют. К 0,1 мл фильтрата добавляют 5 мл воды и измеряют оптическую плотность при А, 530 нм в кювете толщиной 10 мм.

Строят график зависимости величины оптической плотности от концентрации альбумина, по которому определяют количество альбумина, связанного с красителем в исследуемой сыворотке. Отдельно определяют количество альбумина в данной сыворотке. Затем рассчитывают транспортную функцию альбумина. Например, количество альбумина в исследуемой сыворотке составило 60 г/л, а количество альбумина, связанного с красителем, — 25 г/л. Составляют пропорцию: 60 — 100%, а 25 — х%; х = 40%. У здоровых людей этот показатель, отражающий транспортную функцию альбумина, составляет 92%.

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Обнаружение пенициллина реакцией с гидроксиламином

Принцип метода. При нагревании пенициллина и гидроксиламина раскрывается лактамное кольцо пенициллина с образованием а-гидроксамовой кислоты, дающей с хлорным железом продукт конденсации красного цвета.

Реактивы: 1) пенициллин, 0,5% водный раствор; 2) гидроксиламин, 5% раствор; 3) хлорное железо, 5% раствор.

Ход работы К 5 каплям 0,5% водного раствора пенициллина добавляют 2 капли 5% раствора гидроксиламина. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения прибавляют 1 каплю 5% раствора хлорного железа. Появляется розовое или красное окрашивание.

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________