XII.Тема биохимия Бензидиновая проба на кровь

Принцип метода Гемоглобин обладает способностью катализировать окисление бензидина перекисью водорода, Образующиеся при этом продукты окисления бензидина имеют синюю или зеленую окраску. Реакция очень чувствительна'и служит для обнаружения небольших количеств крови в биологических жидкостях.

Реактивы:

1) раствор бензидина — 50 г/л (в ледяной уксусной кислоте, свежеприготовленной); 2) раствор перекиси водорода — 30 г/л; 3) дефибринированная кровь, разведенная водой.

Ход работы: В пробирку наливают 5 капель разведенной дефибринированной крови и такое же количество бензидина, затем добавляют 5 капель раствора перекиси водорода. Появляется синее или зеленое окрашивание.

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Получение кристаллов гемина из гемоглобина (проба Тейхмана)

Принцип метода При нагревании крови с ледяной уксусной кислотой гемоглобин распадается на гем и глобин. Если гидролиз крови проводить в присутствии уксусной кислоты, содержащей галогеновые соли, гем превращается в солянокислую соль — гемин, образующий характерные кристаллы ромбовидной формы. Проба Тейхмана используется в судебно-медицинской практике для доказательства наличия кровяных пятен.

Реактивы, исследуемый материал:

1) ледяная уксусная кислота, содержащая галогеновые соли; 2) кровь.

Ход работы

Стеклянной палочкой наносят на предметное стекло каплю крови, размазывая ее по стеклу. Полученный мазок не должен быть очень тонким, однако и не слишком толстым. Мазок сушат, держа предметное стекло высоко над пламенем горелки (если стекло с кровью держать над самим пламенем или внести в пламя, опыт не удастся). На высохший мазок наносят 2 капли уксусной кислоты, накрывают покровным стеклом и осторожно нагревают до закипания жидкости под стеклом (не.кипятить!). После этого вводят под стекло еще 2 капли уксусной кислоты и рассматривают препарат под микроскопом.

Кристаллы гемина под микроскопом имеют вид ромбовидных палочек, окрашенных в бурый цвет. Кристаллы гемина зарисовывают в тетради.

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Визуальное определение агрегации тромбоцитов

Реактивы: АДФ (0,2 мг/мл) в изотоническом растворе; силиконизированные пипетки на 0,2 мл; пробирки; секундомер.

Ход работы: в пробирку с 0,2 мл плазмы добавляют 0,1 мл раствора АДФ и включают секундомер. Перемешивают. При появлении агрегатов (крупинки) секундомер останавливают. Проводится реакция при комнатной температуре. У здоровых людей образование агрегатов начинается через 17—20 с.

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________