V.Тема: биологическое окисление Лабораторная работа № 9 Обнаружение над в дрожжах

Принцип метода НАД встречается во многих органах и тканях человека и животных, богаты им и дрожжи. НАД легко извлекается из дрожжей горячей водой (он термостабилен) и может быть обнаружен по образованию флуоресцирующего комплекса с ацетоном. Эта реакция характерна для N-производных амида никотиновой кислоты. Она применяется для определения метилникотинамида в моче.

Реактивы:

1. дрожжи,

2. ацетон,

3. 30% раствор NaOH,

4. спиртовой раствор фенолфталеина.

Ход работы. В пробирку помещают кусочек дрожжей величиной 4—5 мм, добавляют 1/3 пробирки воды и кипятят 20—30с, не допуская выбрасывания жидкости. Отфильтровывают в пустую пробирку 5—10 капель полученного экстракта, добавляют 3—5 капель ацетона и 1—2 капли 30% раствора едкого натра. Оставляют пробирку на 2 мин; затем добавляют 1 каплю 5 г/л спиртового раствора фенолфталеина и по каплям концентрированную соляную кислоту до обесцвечивания фенолфталеина. Пробирку в процессе добавления кислоты встряхивают. Поместить пробирку на 2 мин в кипящую водяную баню, затем охладить и поднести к включенному флюориметру. Ацетоновый комплекс НАД флюоресцирует, синим светом.

Результат: __________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лабораторная работа № 10 Обнаружение каталазы в крови

Принцип метода: При окислительных процессах может образовываться перекись водорода, которая разлагается ферментом каталазой (содержится в различных клетках включая кровь) на воду и молекулярный кислород.

Реактивы:

1. 30 г/л перекиси водорода;

2. кровь.

Ход работы: в пробирку внести 10-15 капель 30 г/л перекиси водорода и 3 капли крови. Отметить выделение пузырьков кислорода. При внесении в пробирку тлеющей лучинки она вспыхивает. Так как выделяющийся кислород усиливает горение.

Результат: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лабораторная работа № 11 Сопоставление овп рибофлавина.

Принцип метода: Для исследования ОВП применяют индикаторы, изменяющие свой цвет при определенном значении ОВП. Например, метиленовый синий (синий в окисленном состоянии) превращается в лейкометиленовый синий (бесцветный в восстановленной форме).

Реактивы:

1. цинк гранулированный;

2. концентрированная соляная кислота;

3. взвесь рибофлавина — 0,25 г/л;

4. раствор метиленового синего — 0,1 г/л.

Ход работы: В пробирку вносят 4—6 капель воды, 1 каплю взвеси рибофлавина и по каплям метиленовый синий — до синего или зеленовато-синего окрашивания раствора. Внести в пробирку кусочек цинка и 2—3 капли концентрированной соляной кислоты (начинается выделение пузырьков водорода). По мере насыщения раствора водородом окислительно-восстановительный потенциал смеси постепенно снижается и происходит восстановление рибофлавина и метиленового синего. Восстановление всего объема метиленового синего происходит раньше, чем восстановление значительной части внесенного в пробирку рибофлавина, поэтому цвет жидкости переходит последовательно в зеленый, желто-зеленый, желтый, бледно-желтый или розовый и, наконец, жидкость обесцвечивается за счет восстановления рибофлавина в лейко-соединение.

Бесцветную или розовую жидкость сливают в другую пробирку и наблюдают за изменением окраски. Водород в жидкость больше не поступает, а уже растворенный в ней уходит в воздух и переносится через рибофлавин и метиленовый синий на кислород воздуха. В результате происходит постепенное повышение окислительно-восстановительного потенциала, после расходования в растворе водорода начинается окисление восстановленного рибофлавина. Он передает водород через индикатор метиленовый синий на кислород и желтеет (часть водорода поступает к кислороду, минуя индикатор). После этого начинается окисление лейкометиленового синего — раствор становится сначала зеленым (желтый и синий цвет дают зеленый) и затем синим.

Результат: _________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________