Контрольні питання

1. В чому полягає суть методу визначення вмісту аскорбінової кислоти у рослинних об'єктах?

2. На яких властивостях аскорбінової кислоти засновано цей метод?

Лабораторна робота №14. Гормони.

Мета роботи: практичне вивчення природи та властивостей деяких гормонів. В процесі виконання лабораторної роботи студенти повинні набути навички експериментальних біохімічних досліджень.

Дослід № 1. Виявлення інсуліну біуретовою реакцією.

У пробірку до 5 крапель розчину інсуліну додати 5 крапель 10%-го розчину Натрій гідроксиду та 1 краплю 1%-го розчину Купрум (II) сульфату. Перемішати, струсити. Спостерігати з'явлення фіолетового забарвлення.

Пояснити механізм реакції, зробити висновки.

Дослід № 2. Виявлення інсуліну реакцією Фоля.

У термостійку пробірку внести 5 крапель розчину інсуліну, 5 крапель 30%-го розчину Натрій гідроксиду та 1-3 краплі 5%-го розчину Плюмбум ацетату. При тривалому зберіганні рідина у пробірці буріє та випадає чорний осад Плюмбум сульфіду.

Пояснити механізм реакції, зробити висновок.

Дослід № 3. Реакція Гелера на інсулін.

До 10 краплин концентрованої нітратної кислоти обережно по стінці пробірки прилити 10 крапель розчину інсуліну. Пробірку нахилити під кутом 45° так, щоб рідини не змішувалися. На границі розділу двох рідин утворюється білий аморфний осад у вигляді невеликого кільця.

Дослід № 4. Якісні реакції виявлення адреналіну.

а) Реакція з Ферум (III) хлоридом.

За своєю хімічною природою адреналін є похідним пірокатехіну. Він легко окислюється, перетворюючись в неактивний хінон – аденохром червоного кольору. Далі аденохром полімеризується з утворенням високомолекулярного пігменту коричневого кольору.

У пробірку внести 1 мл адреналіну (1:1000), додати 1 краплю 3%-го розчину Ферум (III) хлориду та перемішати. Рідина набуває смарагдово-зелене забарвлення, При додаванні 1 краплі 10%-го розчину Натрій гідроксиду забарвлення стає вишнево-червоним внаслідок утворення адренохінону, а потім коричневою.

б) Реакція з діазореактивом.

В результаті взаємодії адреналіну з діазосполуками утворюються азобарвники.

До 1 мл 1%-го розчину сульфанілової кислоти додати 1 мл розчину 5%-го розчину Натрій нітриту (утворюється діазореактив). До діазореактиву додати 1,5 мл розчину адреналіну (1:1000) та 1 мл 10%-го розчину Натрій карбонату. Перемішати. Розчин забарвлюється у червоний колір.

Пояснити механізм реакції. Зробити висновок.

Дослід № 5. Реакція на гормони щитовидної залози (тироксин).

При лужному гідролізі тироксину утворюється Калій йодид, з якого йод можна витиснути за допомогою реакції з KJO₃. Йод дає синє забарвлення з крохмалем.

5КJ + КJО₃ + 3H₂SO₄ → 3К₂SO₄+ 3Н₂О + 3J₂

У фарфоровій ступці роздрібнити 5 таблеток тиреоїдину або 100 мг висушеної щитовидної залози. Масу, що утворилася, перенести у колбу за допомогою 5 мл води, додати 5 мл 10%-го розчину Калій гідроксиду та кип'ятити 15 хвилин. До 3 мл охолодженого гідролізату додати 10%-вий розчин сульфатної кислоти до кислого середовища за лакмусом. Після того додати 5 крапель 1%-го розчину крохмалю та 1 мл розчину Калій йодату для окиснення Калій йодиду. Молекулярний йод, що утворюється, дає з крохмалем синє забарвлення.

Дослід № 6. Якісна реакція на фолікулін (естрон) з концентрованою сульфатною кислотою.

Фолікулін (естрон) - статевий гормон стероїдної природи. При взаємодії фолікуліну з концентрованою сульфатною кислотою утворюється ефірна сполука жовтого кольору (фолікулін сульфат)

У маленьку пробірку налити 20 краплин спиртового розчину фолікуліну та помістити її у киплячу водяну баню на 5-10 хвилин для виділення спирту. До фолікуліну, що залишився у пробірці, додати 20 крапель концентрованої сульфатної кислоти та помістити пробірку знову у киплячу водяну баню на 5-10 хвилин. З’являється жовте забарвлення, що під час нагріву переходить в оранжеве, яке має зелену флюоресценцію. З розчином фолікуліну в олії реакцію проводити при кімнатній температурі.

Завдання для самостійної роботи. Вивчити теоретичний матеріал за темою лабораторного заняття, підготувати відповіді на контрольні питання.