5. Укажите, какие питательные среды необходимо использовать для культивирования идентификации возбудителей дифтерии и коклюша.
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
6. Какие экспериментальные животные чувствительны к возбудителям дифтерии и коклюша?
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
7. Изучите схемы лабораторной диагностики дифтерии и коклюша.
8. Ознакомьтесь с инструкцией определения токсигенных свойств возбудителя дифтерии. Определите токсинообразование возбудителя дифтерии по демонстрационному материалу.
Наказ МОЗ України 03.08. 1999 № 192
В основу метода определения токсигенности коринебактерий (in vitro) положено взаимодействие между токсином и антитоксином, которое происходит в плотной питательной среде в месте оптимального количественного соотношения токсина, продуцируемого коринебактериями дифтерии, который диффундирует в агар, и антитоксических антител, содержащихся в антитоксине. В участках агара, где токсин встречается с антитоксином, выпадает преципитат в виде белых линий, “стрел” или “усов” (Элек-тест, Elek-test).
Для постановки пробы на токсигенность необходимо иметь: питательную среду BDTM (среда с пониженным содержанием Fe2+), бумажные полоски, диагностический дифтерийный антитоксин или диски с антитоксином, контрольный токсигенный штамм Parks-Willams 8 (24‑48‑часовая культура).
При использовании бумажных полосок, “бляшки” исследуемой культуры высевают на расстоянии 0,7‑0,8 см одна от другой и на 0,5 см – от края полоски. Посев проводится “бляшками” по обеим сторонам полоски. На одну чашку высевают не более 10 “бляшек”, из них 6 “бляшек” исследуемой культуры, 4 – контрольного штамма. Чашки с посевом ставят в термостат.
Учет результатов проводят через 18‑24 и 48 часов. Критерием оценки специфичности преципитатов является слияние линий преципитации исследуемого штамма с линиями контрольного (токсигенного) штамма.
Исследуемые коринебактерии считаются нетоксигенными:
а) если линии преципитации у исследуемой культуры отсутствуют при наличии специфичных линий преципитации у контрольного штамма;
б) если линии преципитации размещены так, что их концы не могут слиться с концами специфичных линий контрольного штамма, а идут наперекрест с ними (неидентичны);
в) линии преципитации исследуемого штамма сливаются с неспецифическими линиями контрольного штамма;
г) линии преципитации исследуемого штамма перекрещиваются со специфическими линиями и сливаются с неспецифическими линиями контрольного штамма.
Нетоксигенные штаммы, выделенные от больных, направляются в Украинский центр госсанэпиднадзора для окончательного определения токсигенных свойств возбудителя дифтерии методом ПЦР.
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________