18

Міністерство освіти і науки України

Львівський національний університет імені Івана Франка

Біологічний факультет

Кафедра біохімії

ЗВІТ

Про проходження навчально-виробничої практики

«СКРИНІНГ СОРБЕНТІВ З МЕТОЮ ЕФЕКТИВНОГО ОЧИЩЕННЯ АЛКОГОЛЬОКСИДАЗИ ДРІЖДЖІВ HANSENULA POYMORPHA»

Студента групи БЛБ – 34

Чан Дені

База практики:

Відділ аналітичної біотехнології

Інституту біології клітини НАН України

Термін практики

3 Серпня 2010 р. – 31 серпня 2010 р.

Керівники практики

від організації:

к.х.н., ст.н.с. Г. З. Гайда

від кафедри:

асист. І. В. Бродяк

ЛЬВІВ-2010

Зміст

1	Загальна інформація про організацію – базу проходження практики	3
2	Інформація про структуру та організацію роботи біохімічної лабораторії; її забезпеченість реактивами, матеріалами та обладнанням	4
3	Опис виконання практики згідно з календарним планом	5
4	Вступ	6

5 Матеріали та методи досліджень 8

5.1 Об’єкти досліджень 8

5.2. Одержання безклітинного екстракту 8

5.3. Визначення активностi алкоголь оксидази 8

5.4. Визначення концентрації білка 9

5.5. Електрофорез АО H. рolymorpha за нативних умов 9

5.6. Статистична обробка результатів 10

6. Результати досліджень та їх обговорення 11

6.1. Дослідження неорганічних сорбентів з метою імобілізації

алкогольоксидази 11

6.2. Хроматографічна очистка алкогольоксидази на сорбенті діасорб пеі 14

7	Висновки	17
8	Список використаної літератури	18

1. Загальна інформація про організацію – базу проходження практики

Навчально-виробничу практику проходили в період з 3 серпня 2010 року по 31 серпня 2010 року на базі відділу аналітичної біотехнології інституту біології клітини НАН України. Робота стосувалася наукового напрямку "Розробка методів ефективного очищення алкогольоксидази дріжджів Hansenula polymorpha", що є одним з пріоритетних напрямків досліджень відділу у рамках спільного українсько-російського проекту МОН України.

2. Інформація про структуру та організацію роботи біохімічної лабораторії; її забезпеченість реактивами, матеріалами та обладнанням

Для роботи були використані такі реактиви:

• електродний буфер, що складався з 25 мМ трис-HCl (pH 8,3), 192 мМ гліцину та 0,1% SDS.

• реагент А для визначення концентрації білка білка спрощеним методом Лоурі (модифікація Петерсона). Отримують так: змішують рівні об’єми вихідних розчинів татрату-карбонату міді, NaOH, додецилсульфату натрію і води.

• реагент Фоліна (sodium 1,2-naphthoquinone-4-sulfonate) - хімічний реактив, що використовується для визначення кількості амінів і амінокислоти. Внаслідок дії реактиву розчин набуває яскраво-червоного забарвлення в лужному середовищі.

• розчин мономерів “АА” для електрофорезу: 30% акриламід / 0,8% метиленбісакриламід.

• буфер “А” для розділяючого гелю складом: 375 мМ трис-HCl (pH 8,8); 0,4% тетраметилетилендиамін (TEМED).

буфер “Б” для концентруючого гелю складом: 125 мМ трис-HCl (pH 6,8), 0,5% TEMED

• додецилсульфат натрію (SDS) — поверхнево-активна речовина, що в наукових дослідженнях використовується при гелевому електрофорезі для денатурації молекул білків і надання їм „-” заряду.

• о-діанізидин - реагент, який використовується для приготування реакційної суміші на визначення активності алкогольоксидази у розчині.

• Бензидин – речовина, що використовується для якісного визначення алкогольоксидази у електрофореграмах.