Львівський національний університет імені Івана Франка

Біологічний факультет

Кафедра генетики та біотехнології

Дипломна робота бакалавра

на тему: АПРОБАЦІЯ ЛІКАРСЬКИХ ЗАСОБІВ З ВИКОРИСТАННЯМ DROSOPHILA MELANOGASTER, ЯК ТЕСТ- СИСТЕМИ

Виконала:

студентка V курсу, групи БЛБ-53з

напрямку підготовки 6.040102-біологія

Кісіль Катерина Михайлівна

Керівник: к. б. н, доц., Черник Я. І.

Рецензент к.б.н Галан М.Б.

Львів-2015

ЗМІСТ

ВСТУП……………………………………………………………………..............4

1.Основна частина…………………………………...............................................6

1.1. Використання Drosophila melanogaster як модельного об’єкта для вивчення нейродегенеративних розладів..............................................................................................................6

1.2. Долідження експерементальних препаратів з використанням Drosophila melanogaster як модельного об’єкта..............................................................................................................10

1.3.Мультигенна родина супероксиддисмутаз...................................................22

2. Матеріали і методи досліджень.......................................................................31

2.1. Методи досліджень........................................................................................31

2.2. Методика культивування...............................................................................32

2.2.1. Виготовлення гістологічних препаратів зрізів мозку..............................32

2.2.2. Обчислення площі зон дегенерацій...........................................................33

2.2.3. Статистична обробка результатів..............................................................33

3. Результати та їхнє обговорення.......................................................................34

4. ОХОРОНА ПРАЦІ І БЕЗПЕКА В НАДЗВИЧАЙНИХ СИТУАЦІЯХ.........39

4.1. Аналіз стану виробничих умов.....................................................................39

4.1.1. Характеристика лабораторії.......................................................................39

4.1.2. Аналіз методів дослідження і характеристика обладнання.............................................................................................................39

3. Характеристика об’єкту дослідження речовин та їх небезпечні властивості...................................................................................................43

2. . ОРГАНІЗАЦІЙНО ТЕХНІЧНІ ЗАХОДИ.....................................................45

4.2.1. Організація робочого місця та роботи.......................................................45

4.2.2. Санітарно-гігієнічні вимоги при роботі....................................................46

4.2.3. Заходи безпеки при роботі з обладнанням................................................47

4.2.4. Протипожежні заходи при роботі..............................................................48

4.3.АНАЛІЗ ВПЛИВУ ВИРОБНИЧИХ УМОВ НА ДОВКІЛЛЯ......................49

ВИСНОВКИ...........................................................................................................50

СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ.......................................................51

ВСТУП

Нейродегенеративні розлади − одні з найтяжчих і наразі невиліковних порушень, що виникають у людей старшого віку та призводять до передчасної смерті. Найпоширенішими з них є хвороби Паркінсона та Альцгельмера, Хантінгтона, Шарко-Марі-Туз, пов’язані з втратою великої кількості клітин у певних ділянках мозку. Деякі гени, що зумовлюють появу спадкових деменцій, ідентифіковано [35], але молекулярні механізми виникнення таких пошкоджень невідомі. Зважаючи на складність проведення клініко-генетичних досліджень у людини у разі вивчення нейродегенеративних захворювань, використовують модельні організми. Виявлення особливостей морфологічних змін у мутантів дозволить зрозуміти природу нейродегенеративного процесу.

Перевага дрозофіли, як моделі, полягає в тому, що цей об’єкт може бути використано як для мікрохірургічних досліджень з фізіологічної точки зору, так і для з’ясування генетичної природи певних регуляторних процесів, шляхом одержання трансгенних ліній дрозофіли з функціональним нокаутом певних генів, сконструйованих за допомогою новітніх біотехнологічних методів [33, 34].

Існує цілий ряд нових лікарських препаратів пептидної природи, що володіють значним терапевтичним ефектом, однак механізм їх дії залишається не до кінця розкритим і вимагає більш глибокого вивчення з використанням модельних об’єктів. До останніх відносяться мутанти D. melanogaster з дегенеративними змінами мозку [27] та трансгенні лінії, проведення досліджень на яких дозволяє не тільки наблизитися до розуміння патогенезу мутантних змін, а й сприяє пошуку нових терапевтичних підходів і засобів.

Метою даної роботи було дослідити дію препарату «Мітохондрин-2» (М-2) на прояв нейродегенеративного фенотипу у D. melanogaster за функціональної зміни гена Sod1 у гліальній тканині.

Для досягнення мети були поставлені наступні завдання:

- з використанням UAS-Gal4 системи експресії отримати особин із функціональним нокаутом гена Sod1 у гліоцитах.

- дослідити структуру тканини мозку у 21-х особин дослідного генотипу в нормі та після личинкового згодовування експериментного засобу Мітохондрин-2.

- визначити площу зон нейродегенерації у 21-х комах із функціональною інактивацією гена Sod1 в гліальній тканині в нормі та за дії препарату Мітохондрин-2.