1.3 Методи виділення ферментів

 

Процес виділення будь-якого білка починається з переведення білків тканини в розчин. І тому тканину (матеріал), з якої отримують фермент, старанно подрібнюють вгомогенизаторе у присутності буферного розчину. Для кращого руйнацію клітин матеріалу додають кварцовий пісок, якщо матеріал розтирають в ступці. Через війну отримують кашку -гомогенат. Не проводилося попереднє фракціонуванняорганоидов клітини,гомогенат містить шматки клітин, ядра, хлоропласти та іншіорганоиди клітин, розчинні пігменти і білки.

При виділенні ферментів з тканин живих організмів, зокрема рослинних, необхідно додержуватися умов, які викликають денатурацію білка. Всі роботи проводять при зниженою температурі (4⁰З) і за оптимальних для даного ферменту значеннях pH середовища буферного розчину.

Після перекладу ферментів з тканини в розчинене стангомогенат піддаютьцентрифугированию відділення нерозчинною частини матеріалу, потім у окремих фракціяхекстрата-центрифугата виділяютьследуемие ферменти.

Оскільки ферменти є білками, то тут для отримання очищених препаратів ферментів застосовуються самі способи виділення, що й за працювати з білками.

Методи виділення:

· осадження білка органічними розчинниками;

·висаливание;

· метод електрофорезу;

· методионообменной хроматографії;

· метод центрифугування;

· методгельфильтрации;

· методаффинной хроматографії, чи метод хроматографії по спорідненості;

· виборча денатурація.

1.4 Класифікація і номенклатура ферментів на кшталткатализируемой реакції

Класифікація і номенклатура ферментів полягає в типі реакції, що воникатализируют, оскількикатализируемая реакція – що це специфічний ознака, яким один фермент відрізняється від іншого.

У 1961 р. спеціальної комісією Міжнародного біохімічного союзу було запропоновано систематична номенклатура ферментів. Ферменти були підрозділені на 6 груп чи класів відповідно до загальним типом реакції, що воникатализируют:оксидоредуктази,трансферази,гидролази,лиази,изомерази,лигази. [1]

Кожен фермент у своїй отримав систематичне назва, точно яке описуєкатализируемую їм реакцію. Та оскільки з цих систематичних назв були дуже довгими і складними, кожномуферменту було також присвоєно і тривіальне, робочу назву, призначене для повсякденного вживання. Найчастіше воно складається з назви речовини, яким діє фермент, свідчення про типкатализируемой реакції і закінчення –аза.

Міжнародна комісія з ферментам розробила систему присвоєння кодових чисел (шифрів) індивідуальним ферментам.Шифр кожного ферменту містить чотири числа, розділені точками. Він складається за таким принципом:

А. Перше число показує, якого класу належить даний фермент.

 Б. Друге число, яке присвоюєтьсяферменту за класифікацією, позначає підклас. Уоксидоредуктаз воно свідчить про природу тієї групи в молекулі донора, яка піддається окислювання (1- позначає спиртову групу –>CH-OH;2-альдегидную чикетонную групу тощо.); утрансфераз – природу транспортованої групи; угидролаз - типгидролизуемой зв'язку; улиаз – тип зв'язку,подвергающийся розриву; уизомераз – типкатализируемой реакції ізомеризації; улигаз – тип зновуобразуемой зв'язку.

У. третє число позначаєподподкласс. Уоксидоредуктаз воно вказує кожної групи донорів тип бере участі акцептора (1 позначає коферментNAD⁺ чиNASP⁺; 2-цитохром; 3- молекулярний кисень тощо.); утрансфераз третє число позначає тип транспортованої групи; угидролаз їх кількість уточнює типгидролизуемой зв'язку, а й улиаз – типотщепляемой групи; уизомераз воно уточнює характер перетворення субстрату, а й улигаз – природу утворить сполуки.

Р. Четверте число позначає порядковий номер ферменти у цьому підкласі.

>Шифровая класифікація має дуже важливе перевагу – вона дозволяє виключити необхідність включення до списку виявлених ферментів змінювати номери усіх наступних. Новий фермент то, можливо поміщений у кінці відповідного підкласу без порушення решти нумерації.