Перелік практичних навичок

9.Проведення посіву на поживні середовища петлею, шпателем, тампоном.

Посів у пробірку петлею: мікробіологічну петлю у верхній частині полум’я газового пальника. Ліва рука тримає пробірку поверх кисті в дещо нахиленому положенні, потім відкриваємо і прожарюємо край пробірки і корка, тримаючи петлю паралельно до пробірки. Петлю опускають у пробірку, обережно торкаючись стінки, охолоджують, потім опускають у рідину, і вносять штриховими рухами від стінки до стінки матеріал. Потім петлю виймають не торкаючись стінок обжарюють та ставлять в штатив. Потім прожарюють край пробірки і корка та закривають пробірку.

Посів на чашку Петрі шпателем /петлею: шпатель проносять через полум'я газового пальника, охолоджують, торкаючись стінки чашки. Круговими рухами, тримаючи чашку напівзакритою, розпо­діляють матеріал рівномірно по поверхні середовища, візразу закривають чашку та розвертають її. Потім прожарюють шпатель та ставлять його у штатив.

Посів на чашку Петрі тампоном: чашку привідкривають однією рукою, тампоном тор­каються поверхні агару біля краю чашки і починають проводити посів штрихами від краю до краю чашки, втираючи обережно матеріал у поверхню середовища, поступово обертаючи тампон. Потім чашку обертають на 90° і повторюють посів перпендикулярно до попереднього.

10. Проведення пересіву характерної колонії на косий агар і чистої культури в глибину поживного середовища.

Пересів на косий агар: ліва рука тримає дві пробірки: 1 – живильне середовище, 2 – досліджуваний матеріал. Затискають вели­ким та вказівним пальцями. Тримають зверху кисті руки. Пробірки дещо нахилені. Корки три­мають 5, 4 палець правої руки, інші пальці тримають мікробіологічну петлю, яку стерилізують петлю у верхній частині полум'я газового пальника. Край пробіроки проносять через полум'я. Петлю опускають у пробірку, обережно торкаючись стінки, охолоджують. Потім опус­кають у пробірку, набирають матеріал на поверхні середовища. Набирають невелику кількість, без ушкодження живильного середо­вищя. Петлю виймають не торкаючись стінок, переносять в іншу пробірку з середовищем. Штриховими рухами від однієї стінки пробірки до іншої, починаючи з нижньої частини середовища, проводять посів матеріалу по скошеній поверхні агару знизу догори.

16. Виготовлення дез. Розчинів, що застосовуються в мікробіологічній лабораторії.

1. Готують освітлений хлорного вапна: 1 кг сухого хлорного вапна розводять у 9 л холодної води (хлорне вапно подрібнюють дерев’яної лопаткою в емальованому посуді з кришкою або в скляному бутлі з притертим корком).     2. Відстоюють суміш протягом доби.     3. Зливають одержаний розчин в темний скляний посуд, закривають корком .

11. Виготовлення бактеріологічної петлі. Вимоги до неї. Підготування посуду до стерилізації, стерилізація посуду.

Бактеріологічна петля – це інструмент бактеріологічних лабораторій. Використовують його для забору матеріалу, взяття, перенесення, посіву, змішування та ін процедур з невеликою дозою бактерій і. Складається з пластмасового утримувача і петлі . Петлю виготовляють зі шматка платинової або нікелево - сталевого дроту 7 - 10 см. в довжину і діаметром 0,4 - 0,5 мм. Один кінець дроту закріплений в тримачі , інший загнутий у вигляді довгастої петлі розмірами 2x3 мм , причому вушко петлі має бути повністю замкнутим , без видимого зазору. Вимоги: стерилізують до початку і після закінчення роботи прожарюванням на полум'ї пальника протягом 10-15 с. Після прожарювання її охолоджують на повітрі або на стерильній стінці пробірки,чашки .

Стерилізація - це повне знищення всіх мікроорганізмів ( патогенних і сапрофітних ) на об'єкті, який стерилізується. Стерилізацію проводять різними методами : кип'ятінням , парою під тиском ( в автоклавах ), текучим паром ( в апаратах Коха), сухим жаром ( в печах Пастера ), фільтруванням матеріалу через бактеріальні фільтри , прожарюванням на полум'я пальника. Стерилізацію кип'ятінням виробляють в стерилізаторах . Кип'ятінням зазвичай стерилізують інструменти протягом 30-40 хв. Однак при цьому методі не завжди досягають повного знищення мікробів. Спори деяких мікроорганізмів витримують кип'ятіння більше 3 ч. Прожарювання на полум'я застосовують для стерилізації бактеріологічних петель, голок, скальпелів, пінцетів.

Стерилізація в апараті Коха (обробка текучим паром). Така процедура вбиває вегетативні клітини бактерій. Проміжки між стерилізацією необхідні для проростання спор та підвищення чутливості до паровій обробці . Цей прийом використовують для стерилізації як поживних середовищ , так і посуду.

Автоклавування - обробка вологим паром під тиском , проводиться в автоклавах. Вегетативні клітини бактерій і грибів гинуть через 5-10 хвилин вже при температурі близько 60С ; для загибелі спір дріжджів і грибів потрібна температура 120°С протягом 15 хвилин. Тривалість автоклавування залежить від величини пробірок, колб і об'єму поживного середовища в них. Посуд витримують в автоклаві під тиском протягом 20-40 хвилин при температурі 100 - 130oС . Тривалість автоклавування залежить від його режиму : при тиску 0.5 атмосфери - 20-40 хвилин , при 1 атм. - 15 хвилин.При сухому способі стерилізації чашки Петрі , колби , склянки , загорнуті в щільний папір , стерилізують у сушильній шафі при температурі 140°С протягом 2 годин , при температурі 180°С - 30 хвилин. При більш високих температурах ватні пробки буріють , а папір стає ламким.

Стерилізація інструментів. Інструменти ( скальпелі , пінцети , голки і т.д.) стерилізують у сушильній шафі способом. Шприци , ножиці , пробкові свердла зручніше кип'ятити. Металеві предмети не можна автоклавувати : під впливом пари вони іржавіють і тупляться. Безпосередньо перед роботою і в процесі її інструменти поміщають в стакан зі спиртом і обжарюють на полум'ї спиртівки. Стерильний інструмент використовують тільки для одноразової маніпуляції. Перед повторним вживанням його знову занурюють у спирт і обпалюють.

Стерилізація матеріалів. Вату , марлю , ватні пробки , фільтрувальний папір , халати , косинки стерилізують в автоклаві під тиском 2 атм. протягом 25-30 хв.