Лабораторные методы исследования биохимические исследования

В комплексе биохимических исследований важны следующие функциональные показатели : 1) способность печени к транспорту органических анионов, которая оценивается по уровню билирубина или скорости выделения экзогенных красителей; 2) метаболизирующая способность печени на основании выделения лекарств, определения уровня аммиака и фенолов; 3) синтез различных сывороточных белков.

Классификация функциональных проб печени

1. Биотрансформация органических анионов

Показатели пигментного обмена

Пробы с использованием красителей

а) бромсульфалеиновая

б) индоциановая

2. Метаболизирующая (обезвреживающая) способность печени

Лекарственный метаболизм (антипириновая проба)

Выведение галактозы

Определение аммиака, фенолов

3. Показатели синтетической функции печени

Альбумины

Глобулины

Факторы свертывания крови

Липопротеиды

Ферментные маркеры гепатобилиарного заболевания.

Маркеры цитолиза и печеночно-клеточных некрозов

Аминотрансферазы:

АлАТ

АсАТ

Альдолаза Глутаматдегидрогеназа Сорбитдегидрогеназа

Орнитин-карбамилтрансфераза

ЛДГ и ее изоферменты

Маркеры нарушения синтетической функции печени

Холинэстераза

Маркеры холестаза

Щелочная фосфатаза

5-Нуклеотидаза

Лейцинаминопептидаза

γ-Глутамилтранспептидаза

Диагностика хеликобактерной инфекции

Цитологическое исследование. Для цитологического исследования используют мазки-отпечатки биоптатов слизистой оболочки желудка (антрального отдела) при гастроскопии. Биоптат необходимо брать из участков с наибольшей гиперемией и отеком, но не из дна эрозий или язв. Затем мазки высушиваются и окрашиваются по методу Романовкого-Гимзы. Хеликобактерии располагаются в слизи, имеют спиралевидную, изогнутую форму, бывают S-образной формы.

Выделяют три степени обсемененности хеликобактериями:

• слабая (+) – до 20 микробных тел в поле зрения;

• средняя (++) – до 50 микробных тел в поле зрения;

• высокая (+++) – более 50 микробных тел в поле зрения.

Уреазный тест. Хеликобактерии выделяют фермент уреазу, под влиянием которой мочевина, содержащаяся в желудке, разлагается с выделением аммония. Образующийся в результате реакции ион аммония значительно увеличивает рН среды, что можно констатировать с помощью индикатора, а, значит, и отметить визуально по изменению ее окраски.

При наличии в биоптате хеликобактерий среда приобретает малиновую окраску. Время появления малиновой окраски косвенно указывает на количество хеликобактерий.

(+) – незначительная инфицированность (малиновое окрашивание к концу суток);

(++) – умеренная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 2 ч);

(+++) – значительная инфицированность (малиновое окрашивание появляется в течение первого часа);

(-) – результат отрицательный (малиновое окрашивание наступает позже, чем через сутки).

С-уреазный дыхательный тест. Метод основан на том, что принятая внутрь мочевина, меченная ¹³С, под влиянием уреазы хеликобактерий разлагается с образованием аммиака и СО₂. В выдыхаемом СО₂ определяется содержание ¹³С и по его уровню делается заключение об инфицированности хеликобактериями.

Исследование проводится натощак. Вначале в пластиковые пробирки с интервалом в 1 минуту берутся две фоновые пробы выдыхаемого воздуха. Затем больной принимает внутрь легкий пробный завтрак (молоко, сок) и тестовый субстрат (водный раствор мочевины, меченной ¹³С). Затем в течение 1ч с интервалами 15 минут берут 4 пробы выдыхаемого воздуха.

Содержание ¹³С в выдыхаемом воздухе определяется с помощью масс-спекрометра. В зависимости от процентного содержания изотопа ¹³С в выдыхаемом воздухе различают 4 степени инфицированности хеликобактериями:

• менее 3,5% – легкая;

• 3,5 – 6,4% – средняя;

• 6,5 – 9,4% – тяжелая;

• Более 9,5% – крайне тяжелая.

В норме содержание ¹³С в выдыхаемом воздухе не превышает 1% от общего количества СО₂.

Метод чрезвычайно дорог и пока мало доступен.

Микробиологический метод. Посевы для определения хеликобактерий производят с биоптатов слизистой оболочки желудка. Инкубация посевов осуществляется в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода не более 5%. Для создания такой среды применяются специальные газогенераторные химические пакеты. Для роста хеликобактерий используются специальные кровяные питательные среды. Через 3-5 суток на питательной среде появляются мелкие, круглые, прозрачные, росинчатые колонии хеликобактерий. Затем производится идентификация выделенной культуры.

Гистологический метод. Материалом служат биоптаты слизистой оболочки желудка в местах наиболее выраженного воспаления.

Готовятся тонкие срезы и препараты окрашиваются гематоксилином и эозином или по методу Романовского-Гимзы. Хеликобактерии выявляются в виде спиралеобразных, S-образных бактерий.