Станция 5 «окраска мазка по ожешко»

Шаг 1

На нефиксированный мазок наносят 0,5 % р-р HCI и подогревают над племенем горелки в течение 1-2 мин, после чего остатки кислоты сливают

Шаг 2

Промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки.

Шаг 3

Препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят карболовый фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще paз.

Шаг 4

После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой.

Шаг 5

Препарат обесцвечивают 5% р-ом серной кислоты, наливая кислоту на стекло.

Шаг 6

Препарат несколько раз промывают водой.

Шаг 7

Окрашивают водно-спиртовом раствором метиленового-синего в течение 3-5мин.

Шаг 8

Препарат промывают водой и высушивают, промокая фильтровальной бумагой.

Шаг 9

Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла.

Шаг 10

Результат: Споры принимают ярко-красный цвет фуксина. Вегетативное тело бактерии, обесцвеченной серной кислотой, окрашивается дополнительной краской в синий цвет.

Шаг 1

На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в пламени до появления паров.

Шаг 2

Препарат промывают дистиллированной водой, бумагу сбрасывают пинцетом в ванночку для отходов.

Шаг 3

Вносят пипеткой несколько капель на поверхность мазка 5% раствора серной кислоты на 2-4 сек.

Шаг 4

Промывают дистиллированной водой

Шаг 5

Вносят пипеткой несколько капель синьки Леффлера. Время окраски 3-5 минут

Шаг 6

Промывают дистиллированной водой, высушивают фильтровальной бумагой.

Шаг 7

Нанести 1 каплю иммерсионного масла, микроскопировть. Учет результатов: на голубом фоне будут видны палочковидной формы бактерии красного цвета

Шаг 1

на приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;

Шаг 2

повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива Х100;

Шаг 3

осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;

Шаг 4

установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;

Шаг 5

провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.

Шаг 1

Взять три чашки Петри с питательной средой, промаркировать 1,2,3.

Шаг 2

Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.

Шаг 3

Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала.

Шаг 4

В первую чашку Петри вносят каплю материала и стерильным шпателем втирают его в поверхность питательной среды.

Шаг 5

Не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во 2-ю чашку Петри и втирают в поверхность питательной среды.

Шаг 6

Не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят в 3-ю чашку Петри и втирают в поверхность питательной среды.

Шаг 7

Инкубация в термостате при 37⁰С в течение 18-24 часов.

Шаг 8

Результат. Большее количество колоний вырастает в 1-2-й чашках, изолированные колонии – в 3-ей чашке.

Шаг 1

Взять три пробирки с 15 мл расплавленным мясо-пептонным агаром, 3 стерильные чашки Петри, промаркировать 1,2,3.

Шаг 2

Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.

Шаг 3

Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала.

Шаг 4

В первую пробирку вносят каплю материала и вращают несколько раз, зажав между ладонями.

Шаг 5

Прокаленной и остуженной бактериальной петлей содержимого 1-й пробирки переносят во 2-ю пробирку, гомогенизируют вращательными движениями.

Шаг 6

Прокаленной и остуженной бактериальной петлей содержимого 2-й пробирки переносят в 3-ю пробирку, гомогенизируют вращательными движениями.

Шаг 7

Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в пронумерованные стерильные чашки Петри, соответствующим номерам пробирок.

Шаг 8

Инкубация в термостате при 37⁰С в течение 18-24 часов.

Шаг 9

Результат. Большее количество колоний вырастает в 1-2-й чашках, изолированные колонии – в 3-ей чашке.

Шаг 1

Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.

Шаг 2

Бактериальной петлей разделить среду на две половинки по середине кровяного сахарного агара

Шаг 3

Стерильной бактериальной петлей взять культуру анаэробов из среды Китта-Тароцци или каплю исследуемого материала и засевают одну половину агара.

Шаг 4

Простерилизовать бактериальную петлю, взять культуру аэробов, например кишечной палочкой (Escherichia coli) и засеять другую половину питательного агара.

Шаг 5

Засеянные чашки Петри закрывают, инкубируют в анаэробных условиях: в СО₂ инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при температуре 37⁰С на 24-48 часов.

Шаг 6

Второй день. Просматривают посевы, выделяют подозрительные колонии в зоне роста анаэробных бактерий.

Шаг 7

Мазки окрасить по Граму, промикроскопировать

Шаг 8

Результат. Под микроскопом в мазках видны крупные споровые грамположительные палочки