4. Організація лабораторних досліджень на Listeria monocytogenes

Допускається організація лабораторних досліджень шляхом їх поетапного виконання в лабораторіях установ державної санітарно-епідеміологічної служби різних рівнів. При відсутності можливості ідентифікації виділених культур на місці їх передають у лабораторії вищого рівня державної санітарно-епідеміологічної служби, що мають відповідну матеріально-технічну базу і кваліфікований персонал, для видачі остаточного результату.

При передачі культур додержуються вимог “Положения о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактерийных токсинов, ядов биологического происхождения”, затвердженого Головним державним санітарним лікарем СРСР 18.05.79.

5. Сутність методу

Метод виявлення L.monocytogenes, гармонізований з Міжнародним стандартом ISO 11290-1:1996, передбачає визначення наявності або відсутності L. monocytogenes у нормованій масі продукту відповідно до затверджених нормативів, виражених в альтернативній формі і заснованими на існуючій системі відбору зразків і оцінки результатів аналізу.

Метод виявлення бактерій Listeria monocytogenes складається з наступних етапів: посів певної кількості продукту в рідкі селективні середовища, інкубація посівів, виявлення в них бактерій, здатних рости й утворювати типові колонії на щільних диференційно-діагностичних середовищах. Належність виділених культур до Listeria monocytogenes визначається за біохімічними, морфологічними та іншими властивостями. Допускається виявлення бактерій Listeria monocytogenes за допомогою автоматичного імуноаналізатора типу «miniVIDAS» у якості експрес-методу.

При проведенні досліджень харчових продуктів на наявність/відсутність L.monocytogenes застосовуються спеціальні селективні і диференційно-діагностичні середовища. Селективність середовищ стосовно супутньої мікрофлори забезпечується включенням до їх складу хлориду літію, акрифлавіну, циклогексаміду, налідиксової кислоти, поліміксину або інших антибіотиків. Внесення ескуліну і цитрату амонію заліза дозволяє підтверджувати наявність лістерій за почорнінням середовища за рахунок гідролізу ескуліну в присутності іонів Fe⁺.

Підтверджуючі тести родової і видової належності включають фарбування за Грамом, визначення рухливості виділених на щільних середовищах типових за фізіологічними та морфологічними ознаками культур, їх здатності відновлювати нітрати до нітритів, зброджувати рамнозу, ксилозу і маніт, гідролізувати лецитин на середовищі з яєчним жовтком, а також визначення наявності -гемолізу на кров'яному агарі і диференціацію L.monocytogenes від інших гемолізуючих лістерій у САМР-тесті.

6. Апаратура, матеріали, лабораторний посуд, реактиви, поживні середовища

6.1. Апаратура та інструментарій

Баня водяна з підігрівом, в якій підтримується температура (47±2)⁰ С

Бактеріологічні петлі платиново-іридієві, нікелево-хромові, або петлі одноразового користування діаметром 3 мм

Ваги лабораторні загального призначення, 2 і 4 класів точності, з найбільшою межею зважування 200 г

Газова або електрична плитка

Годинник механічний сигнальний (таймер)

Гомогенізатор перистальтичного типу “Стомахер” або інших найменувань

Імуноаналізатор автоматичний типу «miniVIDAS»

Мікроскоп біологічний з фазовим контрастом

Опромінювач бактерицидний ОБН-150 або інших видів

Пальники газові або спиртівки лабораторні

Пінцет медичний

рН-метр (іономір) з поділками шкали до 0,01 рН, за температури 25⁰ С, погрішність вимірів ±0,1 од. рН

Калориметр типу "Денси-ла-метр”

Система для отримання очищеної води аналітичної якості, або дистилятор, що забезпечує якість дистильованої води відповідно до ГОСТ 6709-72

Скальпель хірургічний, 15 см

Стерилізатори парові медичні з максимальним робочим тиском 0,2МПа

Термостати, що дозволяють підтримувати робочу температуру в межах (25±1) ⁰С, (30±1) та (37±1) ⁰С

Холодильник лабораторний або побутовий електричний 

Шафа сушильна стерилізаційна, що дозволяє підтримувати температуру (160±5)⁰С 

Штативи для пробірок

Шпателі металеві або пластикові