- •Міністерство охорони здоров’я україни
- •Завідуючий Сектором із забезпечення діяльності Міністра р.Й.Василишин
- •Методичні вказівки
- •Listeria monocytogenes у харчових продуктах та продовольчій сировині”
- •Загальні положення
- •2. Коротка характеристика мікроорганізмів роду Listeria
- •3. Організація контролю продукції на Listeria monocytogenes
- •4. Організація лабораторних досліджень на Listeria monocytogenes
- •5. Сутність методу
- •6. Апаратура, матеріали, лабораторний посуд, реактиви, поживні середовища
- •6.1. Апаратура та інструментарій
- •6.2. Лабораторний посуд та матеріали
- •7. Підготовка до дослідження
- •7.1. Приготування розчинів та реактивів
- •7.2. Приготування поживних середовищ
- •8. Відбір і підготовка проб харчових продуктів для дослідження
- •8.1. Загальні положення по відбору і підготовці проб
- •8.2. Відбір і підготовка проб молока, молочних продуктів, сирів, морозива
- •8.3. Відбір і підготовка проб м'яса, м'ясних напівфабрикатів, м'яса птахів і птахопродуктів, ковбасних виробів і інших м'ясопродуктів
- •8.4. Відбір і підготовка проб плодоовочевої продукції
- •8.5. Відбір і підготовка проб риби, нерибних об'єктів промислу і продуктів, що з них вироблені
- •8.6. Відбір і підготовка проб продуктів дитячого, лікувального харчування і їх компонентів
- •9. Порядок проведення дослідження
- •10. Виявлення Listeria monocytogenes у реакції наростання титру фага (рнф)
- •11. Визначення Listeria monocytogenes за допомогою автоматичного імуноаналізатора типу “miniVidas”
- •12. Біологічні, серологічні та молекулярно-генетичні дослідження
- •13. Вимоги безпеки
- •14. Нормативні посилання
- •Додаток до методичних вказівок
- •Поживні середовища промислового виробництва, зареєстровані в Україні, рекомендовані для виділення Listeria monocytogenes Для культивування ізолятів
- •Дріжджовий триптон-соєвий агар / бульйон - Tryptone Soya Yeast Extract Agar / Broth (m1214 / m1263)
- •Середовища селективного збагачення Основа бульйону Фрейзера - Fraser Broth Base (m1327)
- •Бульйон збагачення для лістерій - Listeria Enrichment Broth (м569
- •Середовище збагачення для лістерій (uvm) –
- •Бульйон збагачення для лістерій, модифікований –
- •Основа бульйону вторинного збагачення для лістерій –
- •Основа селективного бульйону для лістерій –
- •Диференційно-діагностичні селективні середовища Агар для ідентифікації лістерій (palcam) –
- •Основа Оксфордського середовища для лістерій –
- •Селективний агар для лістерій (двокомпонентне середовище) –
- •Основа агару МакБрайда для лістерій / Основа агару МакБрайда для лістерій модифікована –
- •Основа селективного агару lpm для лістерій - lpm Agar Base (m1228)
- •Нітратний агар / Нітратний бульйон –
- •Бульйон для визначення цукролітичної активності лістерій –
- •Основа бульйону з бромкрезоловим пурпурним для лістерій –
2. Коротка характеристика мікроорганізмів роду Listeria
До збудників лістеріозу належать два із шести відомих на сьогодні видів бактерій роду Listeria - L.monocytogenes (патогенна для людини і тварин) і L.ivanovii (патогенна для тварин, рідко - для людини).
Дев’яте видання «Визначник бактерій Берджі» відносить рід Listeria до 19 групи мікроорганізмів - грампозитивні неспороутворюючі палички правильної форми. Представники цього роду - короткі палички правильної форми, розміром 0,4-0,5х0,5-2 мкм із закругленими кінцями, іноді майже коки, одиничні або в коротких ланцюжках, рідше в довгих нитках. Грампозитивні, спор і капсул не утворюють, не кислотостійкі. Мікроорганізми роду Listeria, вирощені при 35-370С, рухливі за рахунок перитрихіальних джгутиків, при 20-250С ця здатність втрачається. Факультативні анаероби. Хемоорганотрофи, метаболізм бродильного типу; зброджують глюкозу з утворенням в основному L(+)-лактату. Каталазопозитивні, оксидазонегативні. Утворюють цитохроми. Можуть перетворюватися в L-форми і паразитувати внутрішньоклітинно, що обумовлює недостатню ефективність у ряді випадків антибактеріальної терапії, пояснює схильність до затяжного і хронічного перебігу, можливість латентної форми і бактеріоносійства.
Лістерії дуже стійкі в довкіллі, ростуть у широкому інтервалі температур (від 3 до 420С), рН (від < 5,5 до 9,5), добре переносять низькі температури і здатні розмножуватися при температурі (4-6)0С в ґрунті, воді, на рослинах, в органах трупів. У різних харчових продуктах (молоко, м'ясо тощо) розмножуються при температурі побутового холодильника.
У ґрунті, гної, воді, на рослинах вони залишаються життєздатними до 600 діб, на забруднених поверхнях приміщень сільськогосподарського призначення в літній період (9...220С) лістерії зберігають життєздатність до 25 діб, а в зимовий період (- 2 - 230С) до 130 діб. У льоду вони здатні зберігатися від 5,5 міс. до 2,5 років.
При температурі 700С гинуть через 20-30 хвилин, при 1000С - через 3 -5 хвилин; інактивуються розчинами формаліну (0,5%-1%), фенолу (5%), хлорного вапна (100 мг активного хлору в 1дм3).
3. Організація контролю продукції на Listeria monocytogenes
3.1 Лабораторний контроль за відсутністю Listeria monocytogenes у продукції, де нормується цей показник, проводиться:
• в порядку державного санітарно-епідеміологічного нагляду за якістю та безпекою продукції при її виробництві, зберігання, транспортуванні та реалізації, а також наданні послуг у сфері торгівлі і громадського харчування;
• при здійсненні державної санітарно-епідеміологічної експертизи з метою надання відповідних висновків, свідоцтв, дозволів та інших документів, що передбачені чинним законодавством;
• при здійсненні виробничого контролю за якістю та безпекою продукції;
• при проведенні протиепідемічних заходів, а також епідеміологічному розслідуванні захворювань.
3.2. Періодичний відбір зразків харчової продукції для дослідження її за показниками біологічної безпеки, в тому числі і на наявність Listeria monocytogenes, здійснюється відповідно до Положення про державну санітарно-епідеміологічну службу України, затвердженого постановою Кабінету Міністрів України від 19 серпня 2002 р. N 1218.
3.3. Порядок контролю і кратність досліджень встановлюються відповідно до нормативних документів, затверджених або погоджених у встановленому порядку Міністерством охорони здоров’я України, при цьому враховується специфіка виробництва, ступінь його епідемічного ризику, матеріально-технічне оснащення тощо.
Особливу увагу приділяють підприємствам, що виробляють продукти дитячого харчування, дитячим молочним кухням, харчоблокам дитячих лікувально-профілактичних закладів, стаціонарів для онкологічних, гематологічних хворих, будинків дитини, пологових будинків, будинків-інтернатів (пансіонатів) для громадян похилого віку, інвалідів та дітей тощо.
3.3.1. При проведенні державного санітарно-епідеміологічного нагляду мінімальна рекомендована періодичність вибіркового лабораторного контролю продукції - 1 раз у квартал; для дитячого і дієтичного харчування - 2 рази.
3.3.2. При здійсненні виробничого контролю організація і періодичність лабораторних досліджень продукції за показником Listeria monocytogenes встановлюються виробником і, при необхідності, узгоджуються з територіальними установами державної санітарно-епідеміологічної служби. При складанні графіка виробничого контролю продукції за показником Listeria monocytogenes рекомендовано визначати періодичність за п.3.3.1.
3.4. Дослідження продукції за показником Listeria monocytogenes здійснюються лабораторіями державної санітарно-епідеміологічної служби або іншими лабораторіями, що мають дозвіл на роботу, оформлений згідно з вимогами державних санітарних правил ДСП №9.9.5.064.2000 “Порядок видачі дозволів на роботу із мікроорганізмами I-IV груп патогенності та рекомбінантними молекулами ДНК” та атестовані/акредитовані МОЗ України у встановленому порядку.
3.5. Дослідженню за показником „відсутність Listeria monocytogenes в 25 г продукції (у 50-100 г для продуктів дитячого і спеціалізованого харчування)” підлягають - харчові не консервовані продукти: м’ясо та птиця, м’ясопродукти та птахопродукти, молоко та молочні продукти, сири, риба, рибопродукти, нерибні об’єкти промислу та продукція з них, жирові продукти тваринного походження (за винятком жирів топлених), холодні готові страви, що виробляються на об’єктах громадського харчування, торгівлі, в кулінарних цехах тощо (салати, супи, інші продукти та страви з сирих овочів).
3.6. У харчових продуктах, призначених для безпосереднього вживання в їжу, для яких відсутні мікробіологічні нормативи або дані про можливість виділення Listeria monocytogenes, контроль Listeria monocytogenes не проводиться, однак у випадку захворювань людей і/або порушень щодо забезпечення якості і безпеки харчових продуктів зразки таких продуктів повинні бути направлені на лабораторне дослідження.
