Бульйон для визначення цукролітичної активності лістерій –

Carbogydrate Consumption Broth (М1264)

Рекомендується для культивування і диференціації різних видів лістерій.

Склад:	грам/дм3
Протеозопептон Натрію хлорид М'ясний екстракт Бромкрезоловий пурпуровий Кінцеве значення рН (при 250С) 6,8 ± 0,2	10,00 5,00 1,00 0,10

Приготування. Розмішати 16,1 г порошку в 990 см³ дистильованої води. Нагрівати, при необхідності, до повного розчинення компонентів середовища. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Асептично додати 10 см³ стерильного розчину відповідного вуглеводу до кінцевої концентрації 0,5%. Добре перемішати і розлити у пробірки. Готове середовище має пурпуровий колір, прозоре, не має преципітату.

Принцип і оцінка результату. Бульйон для визначення цукролітичної активності використовується для культивування і диференціації лістерій різних видів. Відповідно до рекомендацій FDA і Комітету ISO, він має низьку концентрацію бромкрезолового пурпурного. Диференціація лістерій заснована на здатності ферментувати глюкозу, дульцит, рамнозу, рафінозу і саліцин.

Пептон і м'ясний екстракт є джерелами вуглецю і азоту, включаючи незамінні амінокислоти, вітаміни і мікроелементи, необхідні для метаболізму бактерій. Бромкрезоловий пурпуровий служить індикатором кислотності середовища і при її закисленні жовтіє.

Основа бульйону з бромкрезоловим пурпурним для лістерій –

Purple Broth Base (M284D)

Рекомендовано Комітетом ISO для вивчення ферментації цукрів чистими культурами Listeria.

Склад:	грам/дм3
Протеозопептон Яловичий екстракт Натрію хлорид Бромкрезоловий пурпуровий Кінцеве значення рН (при 250С) 6,8 ± 0,2	10,00 1,00 5,00 0,02

Приготування. Розмішати 16 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Додати 5-10 г певного вуглеводу і стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121°С) протягом 15 хв.

Можливий альтернативний спосіб приготування середовища: до 900 см³ основи бульйону додають 100 см³ 5-10% розчину вуглеводу.

При стерилізації вуглеводів автоклавуванням слід дотримуватися обережності, щоб не допустити гідролізу вуглеводів. Готове середовище має пурпурове забарвлення.

Принцип і оцінка результату: Індикатором ферментації вуглеводів служить бромкрезоловий пурпуровий, який при закисленні середовища забарвлює його в жовтий колір. Утворення газу констатують за появою пухирців в поплавцях.

В бульйон засівають добову чисту культуру лістерій і інкубують протягом 24-72 годин (до 7 днів, якщо буде потрібно) при 35°С. Концентрація вуглеводів, що рекомендується - 1%.

Основа кров'яного агару - Blood Agar Base (М073)

Склад:	грам/дм3
Настій яловичого серця Триптоза Натрію хлорид Агар-агар Кінцеве значення рН (при 250С)	500,00 10,00 5,00 15,00 7,3 ± 0,2

Приготування. Розмішати 40,0 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Прокип'ятити для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до 50⁰С і асептично внести до 5% стерильної дефібринованої крові. Ретельно перемішати і розлити середовище в чашки Петрі. Основа середовища має світло-бурштинове забарвлення, прозора або з легкою опалесценцією при затвердінні. Після додавання крові середовище повинне мати вишнево-червоний колір з легкою опалесценцією.

Принцип і оцінка результату. Це середовище з настоєм серця використовують як основу для приготування кров'яного агару для визначення гемолітичних реакцій. Основа високопоживна і може використовуватись без додавання крові як середовище загального призначення.

Заступник Головного державного

санітарного лікаря України Л.М. Мухарська