Основа селективного агару lpm для лістерій - lpm Agar Base (m1228)

Агар LPM (з літієм, фенілетанолом і моксалактамом) рекомендують для виділення і культивування Listeria monocytogenes з молочних і інших харчових продуктів.

Склад:	грам/дм3
Гідролізат казеїну Пептичний перевар тваринної тканини М'ясний екстракт Гліциновий ангідрид Літію хлорид Натрію хлорид Фенілетанол Агар-агар Кінцеве значення рН (при 250С) 7,3 ± 0,2	5,00 5,00 3,00 10,00 5,00 5,00 2,50 15,00

Приготування. Розмішати 50,5 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 12 хв. Охолодити до 50⁰С і асептично додати добавку FD151. Ретельно перемішати і розлити в чашки Петрі. Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре або з легкою опалесценцією.

Принцип і оцінка результату. Гідролізат казеїну, м'ясний екстракт і пептичний перевар тваринної тканини є джерелом необхідних поживних речовин для росту. Гліциновий ангідрид, хлорид літію і фенілетанол пригнічують ріст грампозитивних коків і грамнегативних паличок. Моксалактам пригнічує ріст грампозитивних і грамнегативних бактерій, включаючи стафілококи, протеї і псевдомонади. При косому освітленні колонії Listeria monocytogenes виглядають веселковими блакитно-зеленими.

Нітратний агар / Нітратний бульйон –

Nitrate Agar / Broth (M072 / M439)

Ці середовища рекомендують для визначення нітратредуктази у бактерій.

Склад:	М072 грам/дм3	М439 грам/дм3
Пептичний перевар тваринної тканини М'ясний екстракт Калію нітрат Агар-агар Кінцеве значення рН (при 250С)	5,00 3,00 1,00 12,00 6,8 ± 0,2	5,00 3,00 1,00 – 7,0 ± 0,2

Приготування. Розмішати 21,0 г порошку М072 або 9,0 г порошку М439 в 1000 см³ дистильованої води. Прокип'ятити для повного розчинення частинок. Розлити в пробірки. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити пробірки з середовищем в нахиленому стані. Готове середовище має світло-бурштиновий колір, прозоре або з легкою опалесценцією.

Принцип і оцінка результату. Здатність відновлювати нітрат є варіабельною ознакою і може використовуватися для диференціації і ідентифікації бактерій, зокрема представників родини ентеробактерій. Неферментуючі бактерії і ряд інших грамнегативних паличок варіюють за здібністю до редукції нітратів. Деякі з них здатні до денітрифікації з відновленням нітрату до газоподібного азоту. Утворення азоту з нітрату є важливим диференціальним тестом для ферментуючих глюкозу грамнегативних бактерій. Відновлення нітрату звичайно відбувається в анаеробних умовах, коли мікроорганізми «відщеплюють» кисень з нітрату. Представники Enterobacteriaceae, зазвичай, відновлюють нітрат до нітриту, який реагує з сульфаніловою кислотою і N,N-диметил-1-нафтиламіном, внаслідок чого розвивається червоне забарвлення (реакція Гріса). Якщо мікроорганізм активно редукує нітрат, тест треба проводити раніше, поки утворений нітрит повністю не перейшов в газоподібний азот.

Приготування реактивів для нітратного тесту:

1.Сульфанілова кислота: розчинити 8,0 г сульфанілової кислоти в 1 дм³ 5N оцтової кислоти.

2.Альфа-Нафтиламіновий реактив: розчинити 5,0 г –нафтиламіну в 1 дм³ 5N оцтової кислоти.

УВАГА: реактиви токсичні, вимагають обережного обігу; уникати піпетування ротом, утворення аерозолів, попадання реактивів на шкіру.

Проведення тесту: Внести декілька крапель кожного реактиву в пробірку з досліджуваною культурою. На відновлення нітрату указує поява червоного або рожевого кольору середовища. Як негативний контроль ставлять тест з незасіяним середовищем. За відсутності почервоніння середовища, в пробірку додають щіпку порошку цинку, щоб переконатися у присутності нітрату в середовищі. Цинк відновлює нітрат, що супроводжується появою червоного забарвлення (у присутності тест-реактиву). Слід мати на увазі, що внесення дуже великої кількості цинку може привести до хибнонегативної реакції. Нітратний тест не є вирішальним для ідентифікації. Остаточну ідентифікацію проводять з урахуванням морфологічних ознак, фарбування за Грамом, біохімічних і серологічних характеристик мікроорганізму.