Селективний агар для лістерій (двокомпонентне середовище) –

Listeria Selective Agar (M567)

Середовище запропоновано для культивування і виділення видів Listeria з клінічного і іншого матеріалу

Склад:		грам/дм3
Частина А:	Гідролізат казеїну Пептичний перевар тваринної тканини Глюкоза Натрію хлорид Тіаміну дихлорид Акрифлавіну гідрохлорид (Трипафлавін) Налідиксова кислота Агар-агар	10,00 10,00 1,00 5,00 0,005 0,01 0,04 13,00
Частина В:	Калію роданід	37,50
	Кінцеве значення рН (при 250С) 7,4 ± 0,2

Приготування Розмішати 39,0 г порошку частини А і 37,5 г порошку частини В в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре або злегка опалесцує.

Принцип і оцінка результату. Гідролізат казеїну і пептичний перевар тваринної тканини є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Тіамін (вітамін групи В) стимулює ріст лістерій. Роданід і налідиксова кислота пригнічують ріст грамнегативних бактерій. Комбінація селективних речовин і акридинових фарбників пригнічує ріст ентерококів. Контаміновані зразки засівають в Бульйон збагачення для лістерій безпосередньо або проводять холодове збагачення в Триптозному бульйоні (М179), після чого культури відсівають на Селективний агар для лістерій. Гемоліз можна перевірити шляхом висіву на Кров'яний агар (М073).

Основа агару МакБрайда для лістерій / Основа агару МакБрайда для лістерій модифікована –

McBride Listeria Agar Base / Modified McBride Listeria Agar Base (M386 / M891)

Середовище використовують для селективного виділення і культивування Listeria monocytogenes з клінічного матеріалу, від персоналу харчових об'єктів і ін.

Склад:	М386 грам/дм3	М891 грам/дм3
Гідролізат казеїну Пептичний перевар тваринної тканини Триптоза М'ясний екстракт Натрію хлорид Гліциновий ангідрид Літію хлорид Фенілетанол Агар-агар Кінцеве значення рН (при 250С) 7,3 ± 0,2	– – 10,00 3,00 5,00 10,00 0,50 2,50 15,00	5,00 5,00 – 3,00 5,00 10,00 0,50 2,50 15,00

Приготування. Розмішати 46,0 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до температури нижче 50⁰С і перед застиганням асептично додати в середовище М386 стерильну дефібриновану кров (до кінцевої концентрації 5% об/об) і в обидва середовища розчинений в 10 см³ 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з добавкою МакБрайда для лістерій (FD171). Ретельно перемішати і розлити в стерильні чашки Петрі. Середовище має світло-бурштинове забарвлення, прозоре або має легку опалесценцію.

Принцип і оцінка результату. Гідролізат казеїну, триптоза, м'ясний екстракт, пептичний перевар тваринної тканини, м'ясний екстракт служать джерелом вуглецю, азоту, мінеральних речовин, вітамінів В, мікроелементів і інших важливих чинників для росту лістерій. Фенілетилалкоголь вибірково пригнічує синтез ДНК, має бактеріостатичну дію на грамнегативні бактерії. Гліцин пригнічує ріст деяких бактерій, включаючи Escherichia coli і Enterococcus faecalis. Хлорид літію також володіє антимікробною активністю.

Визначення Listeria monocytogenes істотно поліпшується при використанні одно- або двохетапного збагачення матеріалу на рідкому середовищі. Відповідно до одноетапного методу, інфікований матеріал засівають безпосередньо на Збагачувальний бульйон для лістерій. За двохетапним методом спочатку матеріал засівають в Триптозний бульйон (М177) і інкубують в холодильнику при 4⁰С протягом декількох тижнів для холодового збагачення (лістерії можуть розмножуватися при низьких температурах). Потім інокулюють Збагачувальний бульйон для лістерій і, далі, роблять висів на селективний агар, наприклад, модифікований агар МакБрайда. Підозрілі на лістерії колонії відбирають при відбитому (45⁰) освітленні. Колонії лістерій щільні білі або веселково-білі, мають вид битого скла. Дрібні колонії мають блакитний відтінок. Колонії інших мікроорганізмів жовто-оранжеві. Агар МакБрайда можна використовувати як основне середовище (з додаванням крові або без неї).