Основа бульйону вторинного збагачення для лістерій –

Fraser Secondary Enrichment Broth Base (М1083)

Це середовище із спеціальною добавкою рекомендують для виділення, культивування і збагачення Listeria monocytogenes з харчових продуктів і об'єктів довкілля.

Склад:	грам/дм3
Протеозопептон Гідролізат казеїну Дріжджовий екстракт М'ясний екстракт Натрію хлорид Літію хлорид Натрію гідрофосфат Калію дигідрофосфат Ескулін Заліза амонійного цитрат Кінцеве значення рН (при 250С) 7,2 ± 0,2	5,00 5,00 5,00 5,00 20,00 3,00 12,00 1,35 1,00 0,50

Приготування. Розмішати 57,85 г порошку в 990 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Остудити до 45-50⁰С і асептично додати розчинений в 10 см³ 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з однією з добавок Фрейзера (FD064 або FD065). Ретельно перемішати і розлити у відповідний посуд.

Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре, з легким преципітатом. Після введення добавки середовище набуває флюоресцентно-жовтого забарвлення і має легкий преципітат.

Принцип і оцінка результату. Протеозопептон, гідролізат казеїну, дріжджовий і м'ясний екстракти є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Хлорид літію пригнічує ріст ентерококів. Усі лістерії гідролізують ескулін до ескулетина, який з іонами заліза формує коричнево-чорний або чорний комплекс. Цитрат амонійного заліза стимулює ріст Listeria monocytogenes. Цей бульйон засівають матеріалом з середовища первинного збагачення. Культури, що виросли на бульйоні Фразера, відсівають на щільні середовища для підтвердження присутності лістерій.

Основа селективного бульйону для лістерій –

Listeria Selective Broth Base (М889)

Це середовище з додаванням селективних речовин рекомендують для селективного виділення і культивування Listeria monocytogenes.

Склад:	грам/дм3
Гідролізат казеїну Папаїновий перевар соєвого борошна Дріжджовий екстракт Натрію хлорид Калію гідрофосфат Глюкоза Кінцеве значення рН (при 250С) 7,3 ± 0,2	17,00 3,00 6,00 5,00 2,50 2,50

Приготування. Розмішати 36,0 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до кімнатної температури і асептично додати розчинений в 5 см³ 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з Селективною добавкою для лістерій II (FD163) або 2 флаконів з Селективною добавкою для лістерій I (FD163I). Перед розливом ретельно перемішати.

Готове середовище має жовте флуоресціююче забарвлення, прозоре, без будь-якого преципітату.

Принцип і оцінка результату. Гідролізат казеїну, папаїновий перевар соєвого борошна і дріжджовий екстракт є джерелом необхідних поживних речовин для росту бактерій. Глюкоза є джерелом енергії. Добавки, що вносяться, надають середовищу селективних властивостей. Циклогексамід пригнічує ріст сапрофітних грибів. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів.

Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см³ матеріалу додають 225 см³ середовища і, при необхідності, подрібнюють. Інкубацію ведуть при 30⁰С до 7 доби. Вказаний період інкубації підходить для більш ефективного виділення пошкоджених зовнішніми чинниками лістерій з молока і молочних продуктів. Через 1, 2, і 7 днів інкубації матеріал висівають на Селективний агар для лістерій.